В связи с особенностями молекулярных механизмов действия тетрахлорметана на субклеточные мембраны, изучение биологического действия гепатотропного яда представляет интерес как модель молекулярной патологии мембранных структур [5]. Четыреххлористый углерод вызывает дозозависимое поражение печени, помимо этого оказывая токсическое влияние на форменные элементы крови, соединительную ткань, морфофункциональное состояние ряда органов и систем.Согласно современным представлениям, значительную роль в развитии патологии при токсическом поражении печени играют свободнорадикальные реакции [8, 9]. Активные формы кислорода вызывают усиленную пероксидацию липидов клеточных мембран, способствуя нарушению равновесия между про- и антиоксидантной системами с последующим формированием окислительного стресса в теплокровном организме, при котором патогенетически обоснованным является назначение лекарственных препаратов, обладающих антиоксидантным и мембранопротекторным действием [1]. Данные свойства выявлены у препаратов, содержащих янтарную кислоту и обладающих широким спектром фармакологической активности [2, 4].В основе большинства внутриклеточных патологических процессов лежит митохондриальная дисфункция, оптимальная коррекция которой возможна введением экзогенного сукцината, способствующего нормализации аэробного окисления в митохондриях, устраняющего разобщение окислительного фосфорилирования и угнетение микросомальных процессов [3]. Согласно современным представлениям о патогенетической метаболической терапии окислительного стресса, кроме янтарной кислоты в состав комбинированных средств целесообразно включать предшественники макроэргов, незаменимые аминокислоты и соединения, корригирующие окислительно-восстановительные процессы. В полной мере этим требованиям отвечает лекарственный препарат Ремаксол® (НТФФ «Полисан», Санкт-Петербург). Ремаксол, в состав которого входят такие активные компоненты как янтарная кислота, рибоксин, никотинамид, метионин, а также электролиты (натрия, магния и калия хлорид) и сольстабилизирующий агент N-метилглюкамин, обладает дезинтоксикационным, антиоксидантным и антигипоксантным действием [6]. В связи с вышеизложенным представляет интерес исследование эффективности ремаксола в коррекции процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) биомембран в условиях токсического повреждения печени тетрахлорметаном.Цель исследования – изучение влияния ремаксола на интенсивность процессов липопероксидации, индуцированных введением четыреххлористого углерода. Материалы и методы исследования Работа выполнена на кафедре госпитальной терапии с курсом фармакологии Амурской государственной медицинской академии. Эксперимент проводили на 80 белых беспородных крысах-самцах массой 180-220 г в течение 14 дней, поскольку проведенными нами ранее исследованиями была показана наиболее выраженная антиоксидантная активность у сукцинатсодержащего препарата Ремаксол к концу второй недели опыта [2].Протокол экспериментальной части исследования на этапах содержания животных, моделирования патологических процессов и выведения их из опыта соответствовал принципам биологической этики, изложенным в Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (1985), Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986), Приказе МЗ СССР №755 от 12.08.1977 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных», Приказе МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики».При завершении научных исследований выведение животных из опыта проводили путем декапитации с соблюдением требований гуманности согласно приложению №4 к Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных − приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.1977 «О порядке проведения эвтаназии (умерщвления животного)». Исследование одобрено Этическим комитетом Амурской государственной медицинской академии.Животные были разделены на 4 группы, в каждой по 20 крыс: 1 группа – интактные крысы, которые содержались в стандартных условиях вивария; 2 группа – контрольная, в которой животным в течение трех дней ежедневно подкожно вводили 50% масляный раствор четыреххлористого углерода в дозе 2 г/кг; 3 и 4 группы – подопытные, где животным перед подкожным введением 50% масляного раствора четыреххлористого углерода в дозе 2 г/кг (введение тетрахлорметана осуществляли в течение трех дней) ежедневно в течение 14 дней внутрибрюшинно вводили, соответственно, ремаксол в дозе 50 мг/кг и 100 мг/кг по сукцинату. Забой животных путем декапитации производили на 7 и 14 сутки. Интенсивность процессов ПОЛ оценивали, исследуя содержание в крови животных гидроперекисей липидов (ГП), диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальдегида (МДА) и компонентов АОС – церулоплазмина, витамина Е, каталазы по методикам, изложенным в ранее опубликованных нами работах [7, 10]. Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия Стъюдента (t) с помощью программы Statistica v.6.0. Результаты считали достоверными при р<0,05. Результаты исследования и их обсуждение Отравление четыреххлористым углеродом является классической моделью перекисного повреждения, что было подтверждено результатами проведенных исследований (табл. 1). Введение тетрахлорметана крысам сопровождается активацией процессов ПОЛ и накоплением продуктов пероксидации в крови контрольных животных: увеличением содержания ГП – на 24% (7 день) и 20% (14 день эксперимента) в сравнении с аналогичным показателем в группе интактных крыс; ДК – на 19% (7 день) и 17% (14 день эксперимента); МДА – на 59% (7 день) и 51% (14 день эксперимента), что связано с образованием свободных радикалов из CCl4. Образующийся при метаболизме ксенобиотика в системе цитохрома Р-450 трихлорметильный радикал, в свою очередь, реагирует с кислородом с образованием еще более токсичного трихлорметилпероксильного радикала. Таким образом, CCl4 подвергается биотрансформации, приводящей к образованию реактивных продуктов в ходе первой фазы метаболизма ксенобиотика, в последующем продукты первой фазы поступают в общий кровоток, оказывая действие на органы и системы.В свою очередь, введение сукцинатсодержащего препарата Ремаксол на фоне применения тетрахлорметана сопровождалось достоверным снижением содержания продуктов радикального характера в сравнении с показателями в контрольной группе. На фоне применения ремаксола в дозе 50 мг/кг концентрация ГП уменьшилась на 2% (7 день, 14 день эксперимента); ДК – на 4% (7 день, 14 день эксперимента); МДА –  на 13% (7 день) и 24% (14 день эксперимента). На фоне введения ремаксола в дозе 100 мг/кг содержание ГП снизилось на 7% (7 день) и 12% (14 день эксперимента); ДК – на 7% (7 день) и 11% (14 день эксперимента); МДА – на 19% (7 день) и 23% (14 день эксперимента). Указанные изменения согласуются с результатами исследований, опубликованными нами ранее, которыми был показан антиоксидантный эффект сукцинатсодержащего препарата Ремаксол в условиях холодовой экспериментальной модели [2].Таблица 1Содержание продуктов ПОЛ в крови экспериментальных животных (М±m) Показатели, нмоль/млСроки экспериментаИнтактные крысыВведение CCl4Введение CCl4 и ремаксола в дозе 50 мг/кгВведение CCl4 и ремаксола в дозе 100 мг/кгГП7 день27,3±0,7433,8±1,31*33,4±0,8631,6±0,7514 день28,4±0,6934,2±1,18*33,7±1,1329,8±1,00**ДК7 день35,7±1,1042,5±1,42*41,0±1,0039,5±1,2514 день36,5±1,3142,8±0,92*41,1±0,5838,0±1,42**МДА7 день3,9±0,126,2±0,28*5,4±0,275,0±0,32**14 день4,1±0,216,2±0,24*4,7±0,22**4,8±0,28** Примечание: здесь и далее * – достоверность различия показателей по сравнению с группой интактных животных (р<0,05); ** – достоверность различия показателей по сравнению с группой животных, которым вводили тетрахлорметан (р<0,05). Таблица 2Содержание компонентов АОС в крови экспериментальных животных (М±m) Показатели, нмоль/млСроки экспериментаИнтактные крысыВведение CCl4Введение CCl4 и ремаксола в дозе 50 мг/кгВведение CCl4 и ремаксола в дозе 100 мг/кгЦерулоплазмин, мкг/мл7 день25,4±0,5720,0±0,58*21,8±0,7024,6±0,75**14 день25,5±0,7720,2±0,79*22,7±0,32**25,0±0,66**Витамин Е,мкг/мл7 день45,4±0,8237,2±1,25*41,8±1,8042,4±1,35**14 день45,8±0,9936,5±0,87*42,5±0,92**44,0±1,12**Каталаза,мкмоль Н2О2 г-1с-17 день127±2,94107±4,15*121±1,93**125±4,25**14 день126±2,84102±5,12*125±3,79**126±4,60**Активация процессов ПОЛ при введении четыреххлористого углерода сопровождается напряжением АОС (табл. 2): содержание церулоплазмина в крови контрольных крыс в сравнении с интактными животными снизилось на 21% (7 день, 14 день эксперимента); витамина Е – на 18% (7 день) и 20% (14 день эксперимента); каталазы – на 16% (7 день) и 19% (14 день эксперимента), что согласуется с проведенными нами ранее исследованиями [9] и вполне логично, поскольку при индукции биосинтеза продуктов пероксидации в условиях отравления тетрахлометаном напряжение функционирования звеньев антиоксидантной защиты организма приводит к постепенному истощению компонентов АОС. Использование сукцинатсодержащего препарата для коррекции окислительного стресса, индуцированного введением четыреххлористого углерода, способствовало повышению активности АОС в крови подопытных животных: на фоне введения ремаксола в дозе 50 мг/кг содержание церулоплазмина выросло на 9% (7 день) и 12% (14 день эксперимента) по сравнению с аналогичным показателем в группе контрольных крыс; на фоне введения ремаксола в дозе 100 мг/кг – на 23% и 24%, соответственно. Уровень витамина Е при использовании ремаксола в дозе 50 мг/кг увеличился на 12% (7 день) и 16% (14 день), при использовании ремаксола в дозе 100 мг/кг – на 14% и 21% относительно контрольных животных. В свою очередь, исследование активности каталазы в условиях коррекции введением препарата, содержащего янтарную кислоту, позволило констатировать повышение активности данного фермента в среднем  на 13-24%.Таким образом, результаты проведенных исследований подтверждают антиоксидантную активность ремаксола, вводимого внутрибрюшинно в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг по сукцинату, при отравлении подопытных животных тетрахлорметаном, причем в очередной раз экспериментально была показана прямая дозозависимость сукцинатсодержащего препарата, отражающая более выраженный антиокислительный эффект при использовании лекарственного средства в дозе 100 мг/кг. Янтарная кислота в составе комбинированного препарата способствует активации сукцинатдегидрогеназного окисления, восстановлению активности ключевого фермента дыхательной цепи – цитохромоксидазы, что позволяет обеспечить энергокоррекцию, активизировать защитные механизмы, повышающие резистентность к окислительному стрессу за счет активации собственных антиоксидантных систем. Антиоксидантный эффект янтарной кислоты в рецептуре препарата дополняется метионином, который превращается в организме в адеметионин под влиянием метионинаденозилтрансферазы. Адеметионин участвует в биологических реакциях трансметилирования, обеспечивающих текучесть и поляризацию мембран за счет увеличения содержания фосфолипидов, и в реакциях транссульфатирования, восстанавливающих уровень эндогенного глутатиона. Введение  никотинамида активирует антиоксидантные системы убихиноновых оксидоредуктаз, защищающие мембраны клеток от разрушения активными радикалами. Антиоксидантное действие рибоксина реализуется за счёт активации синтеза никотинамидадениндинуклеотида в митохондриях из никотинамида, где рибоксин выступает в качестве донора рибозы, стимуляции анаэробного гликолиза с образованием лактата и никотинамидадениндинуклеотида, ингибирования фермента ксантиноксидазы и подавления радикальных процессов.В целом, экспериментально подтверждена и обоснована возможность коррекции процессов липопероксидации, индуцированных применением четыреххлористого углерода, введением сукцинатсодержащего препарата Ремаксол. Выводы Введение четыреххлористого углерода лабораторным животным индуцирует формирование синдрома липопероксидации в условиях накопления продуктов ПОЛ и снижения уровня основных компонентов АОС в крови крыс.Использование в эксперименте сукцинатсодержащего препарата Ремаксол в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг по сукцинату снижает интенсивность процессов ПОЛ биомембран в условиях отравления животных тетрахлорметаном, что подтверждается уменьшением содержания продуктов пероксидации на фоне достоверного увеличения активности основных компонентов АОС.