Medical Radiology and radiation safetyMedical Radiology and radiation safetyМедицинская радиология и радиационная безопасность1024-61772618-96152007210.12737/article_5a855c9d5b1211.49546901Радиационная биологияRadiation biologyРадиационная биология3H-Thymidine Influence on DNA Double Strand Breaks Induction in Cultured Human Mesenchymal Stem CellsВлияние 3H‑тимидина на индукцию двунитевых разрывов ДНК в мезенхимальных стволовых клетках человекаВоробьеваН. Ю.Vorob'evaN. Yu.
кандидат биологических наук;
candidate of sciences in biology;
УйбаВ. В.UybaV. V.
доктор медицинских наук;
doctor of medical sciences;
КочетковО. А.KochetkovO. A.
кандидат технических наук;
candidate of technical sciences;
АстрелинаТ. А.AstrelinaT. A.
доктор медицинских наук;
doctor of medical sciences;
ПустоваловаМ. В.PustovalovaM. V.
кандидат биологических наук;
candidate of sciences in biology;
ГреховаА. К.GrehovaA. K.
кандидат биологических наук;
candidate of sciences in biology;
БлохинаТ. М.BlohinaT. M.ЯшкинаЕ. И.YashkinaE. I.КабановД. И.KabanovD. I.НикитинаВ. А.NikitinaV. A.
кандидат медицинских наук;
candidate of medical sciences;
СучковаЕ. Б.SuchkovaE. B.КобзеваИ. В.KobzevaI. V.
кандидат медицинских наук;
candidate of medical sciences;
ОсиповА. Н.OsipovA. N.
доктор биологических наук;
doctor of sciences in biology;
Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральное медико-биологическое агентствоМоскваРоссияFederal Medical and Biological AgencyMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center of FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian FederationФедеральный медицинский биофизический центр им. А.И.Бурназяна ФМБА РоссииМоскваРоссияA.I. Burnasyan Federal Medical Biophysical Center (FMBC) FMBAMoscowRussian Federation6312834https://zh-szf.ru/en/nauka/article/20072/view
Цель: оценить влияние 3H-тимидина на индукцию двунитевых разрывов (ДР) ДНК в культивируемых мезенхимальных стволовых клетках (МСК) человека.
Материал и методы: Выделение и культивирование МСК костного мозга человека проводили по стандартной методике. К культуре клеток добавляли стерильный раствора 3H-тимидина с различной удельной радиоактивностью и инкубировали в условиях СО2-инкубатора в течение 24 ч. Удельная радиоактивность 3H-тимидина в среде инкубации составляла 50–1600 кБк/мл. Для количественной оценки ДР ДНК использовали иммуноцитохимический анализ фокусов гистона γH2AX. Дополнительно оценивали долю делящихся клеток с использованием иммуноцитохимического анализа маркера клеточной пролиферации – белка Ki67.
Результаты: Показано, что 24 ч инкубация МСК человека в культуральной среде, приводит к дозозависимому увеличению количества фокусов γH2AX. Наблюдается линейное увеличение числа фокусов γH2AX в диапазоне удельных активностей 50–400 кБк/мл, после чего относительный количественный выход фокусов на единицу удельной радиоактивности начинает снижаться. В целом, зависимость доза–эффект аппроксимируется квадратичной функцией у = 3,13 + 50,80x – 12,38x2 (R2 = 0,99), где у – количество фокусов γH2AX в клеточном ядре, а х – удельная радиоактивность в единицах 1000 кБк/мл. Обнаружено, что 24 ч инкубация МСК человека в культуральной среде, содержащей 800 и 1600 кБк/мл 3Н‑тимидина, приводит к статистически значимому снижению пролиферативной активности клеток по сравнению с контролем ~ в 1,25 и 1,41 раза соответственно. Своеобразное биологическое ограничение накопления трития в клеточном ядре хорошо объясняет наблюдаемый в наших исследованиях нелинейный характер зависимости образования ДР ДНК от удельной радиоактивности 3Н-тимидина в культуральной среде.
Заключение: Количественный анализ фокусов γH2AX показал себя как хорошо воспроизводимый и высокочувствительный метод оценки индукции ДР ДНК в живых клетках при воздействии 3Н-тимидина. Анализ фокусов γH2AX будет крайне востребован для уточнения количественного выхода ДР ДНК в живых клетках на дозу β-излучения трития. Для этого необходимо провести корректный расчет дозы, получаемой клетками с учетом микрораспределения 3Н-тимидина в клеточном объеме и его накопления в ДНК живых клеток.
Purpose: To estimate the impact of 3H-thymidine on DNA double strand breaks (DSBs) induction in cultured human
mesenchymal stem cells (MSC).
Material and methods: Isolation and cultivation of human bone marrow MSC was carried out according to a standard procedure.
A sterile solution of 3H-thymidine with different specific radioactivity was added to the cell culture and incubated under the conditions
of the CO2 incubator for 24 hours. The specific radioactivity of 3H-thymidine in the incubation medium was 50–1600 kBq/ml. To
evaluate quantitatively the DSBs, an immunocytochemical analysis of the DSB marker – γH2AX foci histone was used. Additionally,
the proportion of dividing cells was estimated using an immunocytochemical analysis of the cell proliferation marker, the Ki67
protein.
Results: It was shown that 24 h incubation of human MSC in a culture medium results in a dose-dependent increase in γH2AX
foci. There is a linear increase in the foci γH2AX in the range of 50–400 kBq/ml, after which the relative quantitative yield of foci per
unit of specific radioactivity begins to decrease. In general, the dose-effect relationship is approximated by the quadratic function y
= 3.13 + 50.80x – 12.38x2 (R2 = 0.99), where y is the number of foci γH2AX in the cell nucleus, and x is the specific radioactivity in
1000 kBq/ml. It was found that incubation of human MSC in a culture medium containing 800 and 1600 kBq/ml of 3H-thymidine
resulted in a statistically significant decrease in the cells proliferative activity compared to the control of ~1.25 and 1.41 respectively.
The peculiar biological limitation of tritium accumulation in the cell nucleus explains well the nonlinear character of the dependence
of the formation of DSBs on the specific radioactivity of 3H-thymidine in the culture medium observed in our study.
Conclusion: Quantitative analysis of γH2AX foci has proved to be a highly reproducible and highly sensitive method for
evaluating the induction of DSBs in living cells under the action of 3H-thymidine. An analysis of the foci of γH2AX will be useful
for accurate estimating the quantitative yield of DBS in living cells per dose of 3H-thymidine β-radiation. To do this, it is necessary
to make a correct calculation of the doses received by the cells taking into account the microdistribution of 3H-thymidine in the cell
volume and its accumulation in the DNA of living cells.
Тритий (3H), радиоактивный изотоп водорода, является одним из основных побочных продуктов ядерной промышленности, попадающих в окружающую среду [1, 2]. Тритий превращается в стабильный изотоп гелия путем β-распада, излучая низкоэнергетический электрон со средней энергией 5,7 кэВ и частицу антинейтрино. В среднем длина пробега β-частицы, испускаемой тритием, составляет всего 0,4–0,6 мкм, что меньше диаметра соматической клетки [3]. Таким образом, тритий представляет опасность для здоровья человека только при поступлении в организм. В качестве изотопа водорода тритий входит в состав молекул воды (оксид трития – НТО), неорганических и органических молекул (органически связанный тритий – OСT) [4].
Kotzer T., Trivedi A. Dosimetric implications of atmospheric dispersal of tritium near a heavy-water research reactor facility // Radiat. Prot. Dosim. 2001. Vol. 93. P. 61-66.Kotzer T., Trivedi A. Dosimetric implications of atmospheric dispersal of tritium near a heavy-water research reactor facility // Radiat. Prot. Dosim. 2001. Vol. 93. P. 61-66.Okada S., Momoshima N. Overview of tritium. characteristics, sources, and problems // Health Phys. 1993. Vol. 65. P. 595-609.Okada S., Momoshima N. Overview of tritium. characteristics, sources, and problems // Health Phys. 1993. Vol. 65. P. 595-609.Alloni D., Cutaia C., Mariotti L. et. al. Modeling dose deposition and DNA damage due to low-energy beta(-) emitters // Radiat. Res. 2014. Vol. 182. P. 322-330.Alloni D., Cutaia C., Mariotti L. et. al. Modeling dose deposition and DNA damage due to low-energy beta(-) emitters // Radiat. Res. 2014. Vol. 182. P. 322-330.Melintescu A., Galeriu D. Uncertainty of current understanding regarding OBT formation in plants // J. Environ. Radioact. 2017. Vol. 167. P. 134-149.Melintescu A., Galeriu D. Uncertainty of current understanding regarding OBT formation in plants // J. Environ. Radioact. 2017. Vol. 167. P. 134-149.Dingwall S., Mills C.E., Phan N.et al. Human health and the biological effects of tritium in drinking water. Prudent policy through science - addressing the ODWAC new recommendation // Dose Response. 2011. Vol. 9. P. 6-31.Dingwall S., Mills C.E., Phan N.et al. Human health and the biological effects of tritium in drinking water. Prudent policy through science - addressing the ODWAC new recommendation // Dose Response. 2011. Vol. 9. P. 6-31.Umata T. Estimation of biological effects of tritium // J. UOEH. 2017. Vol.39. P. 25-33.Umata T. Estimation of biological effects of tritium // J. UOEH. 2017. Vol.39. P. 25-33.Little M.P., Lambert B.E. Systematic review of experimental studies on the relative biological effectiveness of tritium // Radiat. Environ. Biophys. 2008. Vol. 47. P. 71-93.Little M.P., Lambert B.E. Systematic review of experimental studies on the relative biological effectiveness of tritium // Radiat. Environ. Biophys. 2008. Vol. 47. P. 71-93.Task Group on Radiation Quality Effects in Radiological Protection CoREICoRP. Relative biological effectiveness (RBE), quality factor (Q), and radiation weighting factor (w(R)). A report of the International Commission on Radiological Protection // Ann ICRP. 2003. Vol. 33. P. 1-117.Task Group on Radiation Quality Effects in Radiological Protection CoREICoRP. Relative biological effectiveness (RBE), quality factor (Q), and radiation weighting factor (w(R)). A report of the International Commission on Radiological Protection // Ann ICRP. 2003. Vol. 33. P. 1-117.Harrison J. Doses and risks from tritiated water and environmental organically bound tritium // J. Radiol. Prot. 2009. Vol. 29. P. 335-349.Harrison J. Doses and risks from tritiated water and environmental organically bound tritium // J. Radiol. Prot. 2009. Vol. 29. P. 335-349.Balonov M.I., Muksinova K.N., Mushkacheva G.S. Tritium radiobiological effects in mammals. review of experiments of the last decade in Russia // Health Phys. 1993. Vol. 65. P. 713-726.Balonov M.I., Muksinova K.N., Mushkacheva G.S. Tritium radiobiological effects in mammals. review of experiments of the last decade in Russia // Health Phys. 1993. Vol. 65. P. 713-726.Балонов М.И., Чипига Л.А. Оценка дозы от поступления окиси трития в организм человека. Роль включения трития в органическое вещество тканей // Радиац. гигиена. 2016. Т. 9. №4. С. 16 - 25.Balonov M.I., Chipiga L.A. Estimation of the dose from the intake of tritium oxide in the human body. The role of inclusion of tritium in the organic matter of tissues // Radiats. Gigiena (‘Radiation Hygiene’). 2016. Vol. 9. № 4. P. 16-25. (In Russian. English abstracts. PubMed)Кочетков О.А., Монастырская С.Г., Кабанов Д.И. Проблемы нормирования техногенного трития // Саратовский научно-медицинский журнал. 2013. Т. 9. №4. С. 815-819.Kochetkov O.A., Monastyrskaya S.G., Kabanov D.I. Problems of rationing technogenic tritium // Saratov Journal of Medical Scientific Research. 2013. Vol. 9. № 4. P. 815-819. (In Russian. English abstracts. PubMed)Korzeneva I.B., Kostuyk S.V., Ershova L.S. et al. Human circulating plasma DNA significantly decreases while lymphocyte DNA damage increases under chronic occupational exposure to low-dose gamma-neutron and tritium β-radiation // Mutation Res./Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 2015. Vol. 779. P. 1-15.Korzeneva I.B., Kostuyk S.V., Ershova L.S. et al. Human circulating plasma DNA significantly decreases while lymphocyte DNA damage increases under chronic occupational exposure to low-dose gamma-neutron and tritium β-radiation // Mutation Res./Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis. 2015. Vol. 779. P. 1-15.Osipov A.N., Grekhova A., Pustovalova M. et al. Activation of homologous recombination DNA repair in human skin fibroblasts continuously exposed to X-ray radiation // Oncotarget. 2015. Vol. 6. P. 26876-26885.Osipov A.N., Grekhova A., Pustovalova M. et al. Activation of homologous recombination DNA repair in human skin fibroblasts continuously exposed to X-ray radiation // Oncotarget. 2015. Vol. 6. P. 26876-26885.Osipov A.N., Pustovalova M., Grekhova A. et al. Low doses of X-rays induce prolonged and ATM-independent persistence of gammaH2AX foci in human gingival mesenchymal stem cells // Oncotarget. 2015. Vol. 6. P. 27275-27287.Osipov A.N., Pustovalova M., Grekhova A. et al. Low doses of X-rays induce prolonged and ATM-independent persistence of gammaH2AX foci in human gingival mesenchymal stem cells // Oncotarget. 2015. Vol. 6. P. 27275-27287.Kotenko K.V., Bushmanov A.Y., Ozerov I.V. et al. Changes in the number of double-strand DNA breaks in Chinese hamster V79 cells exposed to gamma-radiation with different dose rates // Int. J. Mol. Sci. 2013. Vol. 14. P. 13719-13726.Kotenko K.V., Bushmanov A.Y., Ozerov I.V. et al. Changes in the number of double-strand DNA breaks in Chinese hamster V79 cells exposed to gamma-radiation with different dose rates // Int. J. Mol. Sci. 2013. Vol. 14. P. 13719-13726.Halazonetis T.D., Gorgoulis V.G., Bartek J. An oncogene-induced DNA damage model for cancer development // Science. 2008. Vol. 319. P. 1352-1355.Halazonetis T.D., Gorgoulis V.G., Bartek J. An oncogene-induced DNA damage model for cancer development // Science. 2008. Vol. 319. P. 1352-1355.Chen J. Estimated yield of double-strand breaks from internal exposure to tritium // Radiat. Environ. Biophys. 2012. Vol. 51. P. 295-302.Chen J. Estimated yield of double-strand breaks from internal exposure to tritium // Radiat. Environ. Biophys. 2012. Vol. 51. P. 295-302.Moiseenko V.V, Waker A.J, Hamm R.N, Prestwich W.V. Calculation of radiation-induced DNA damage from photons and tritium beta-particles. Part II. Tritium RBE and damage complexity // Radiat. Environ. Biophys. 2001. Vol. 40. P. 33-38.Moiseenko V.V, Waker A.J, Hamm R.N, Prestwich W.V. Calculation of radiation-induced DNA damage from photons and tritium beta-particles. Part II. Tritium RBE and damage complexity // Radiat. Environ. Biophys. 2001. Vol. 40. P. 33-38.Vignard J., Mirey G., Salles B. Ionizing-radiation induced DNA double-strand breaks. A direct and indirect lighting up // Radiother. Oncol. 2013. Vol. 108. № 3. P. 362-369.Vignard J., Mirey G., Salles B. Ionizing-radiation induced DNA double-strand breaks. A direct and indirect lighting up // Radiother. Oncol. 2013. Vol. 108. № 3. P. 362-369.Sharma A, Singh K, Almasan A. Histone H2AX phosphorylation. a marker for DNA damage // Methods Mol. Biol. 2012. Vol. 920. P. 613-626.Sharma A, Singh K, Almasan A. Histone H2AX phosphorylation. a marker for DNA damage // Methods Mol. Biol. 2012. Vol. 920. P. 613-626.Tsvetkova A., Ozerov I.V., Pustovalova M et al. γH2AX, 53BP1 and Rad51 protein foci changes in mesenchymal stem cells during prolonged X-ray irradiation // Oncotarget. 2017. Vol. 8. № 38. P. 64317-64329.Tsvetkova A., Ozerov I.V., Pustovalova M et al. γH2AX, 53BP1 and Rad51 protein foci changes in mesenchymal stem cells during prolonged X-ray irradiation // Oncotarget. 2017. Vol. 8. № 38. P. 64317-64329.Грехова А.К., Еремин П.С., Осипов А.Н. и соавт. Замедленные процессы образования и деградации фокусов γН2AX в фибробластах кожи человека, облученных рентгеновским излучением в малых дозах // Радиац. биол. Радиоэкология. 2015. Т. 55. № 4. C. 395-401.Grekhova A.K., Eremin P.S., Osipov A.N. et al. Delayed processes of γH2AX foci formation and degradation in human skin fibroblasts irradiated with x-rays in low doses // Radiats. Biol. Radioekologia (‘Radiation biology. Radioecology’). 2015. Vol. 55. № 4. P. 395-401. (In Russian. English abstracts. PubMed)Pustovalova M., Grekhova A., Astrelina Т. et al. Accumulation of spontaneous γH2AX foci in long-term cultured mesenchymal stromal cells. // Aging (Albany NY). 2016. Vol. 8. № 12. P. 3498-3506.Pustovalova M., Grekhova A., Astrelina T. et al. Accumulation of spontaneous γH2AX foci in long-term cultured mesenchymal stromal cells. // Aging (Albany NY). 2016. Vol. 8. № 12. P. 3498-3506.Pustovalova M., Astrelina Т.A., Grekhova A. et al. Residual γH2AX foci induced by low dose x-ray radiation in bone marrow mesenchymal stem cells do not cause accelerated senescence in the progeny of irradiated cells. // Aging (Albany NY). 2017. Vol. 9. №11. P. 2397-2410.Pustovalova M., Astrelina T.A., Grekhova A. et al. Residual γH2AX foci induced by low dose x-ray radiation in bone marrow mesenchymal stem cells do not cause accelerated senescence in the progeny of irradiated cells. // Aging (Albany NY). 2017. Vol. 9. №11. P. 2397-2410.Paull T.T., Rogakou E.P., Yamazaki V. et al. A critical role for histone H2AX in recruitment of repair factors to nuclear foci after DNA damage // Curr. Biol. 2000. Vol. 10. P. 886-895.Paull T.T., Rogakou E.P., Yamazaki V. et al. A critical role for histone H2AX in recruitment of repair factors to nuclear foci after DNA damage // Curr. Biol. 2000. Vol. 10. P. 886-895.Lobrich M., Shibata A., Beucher A. et al. GammaH2AX foci analysis for monitoring DNA double-strand break repair. strengths, limitations and optimization // Cell Cycle. 2010. Vol. 9. P. 662-669.Lobrich M., Shibata A., Beucher A. et al. GammaH2AX foci analysis for monitoring DNA double-strand break repair. strengths, limitations and optimization // Cell Cycle. 2010. Vol. 9. P. 662-669.Gonen R.G.U.. Alfassi Z.B.. Priel E. Production of DNA double strand breaks in human cells due to acute exposure to tritiated water (HTO). Conference of the Nuclear Societies in Israel. Dead Sea (Israel). 11-13 Feb 2014. P. 69-73.Gonen R.G.U.. Alfassi Z.B.. Priel E. Production of DNA double strand breaks in human cells due to acute exposure to tritiated water (HTO). Conference of the Nuclear Societies in Israel. Dead Sea (Israel). 11-13 Feb 2014. P. 69-73.Saintigny Y., Roche S., Meynard D., Lopez B.S. Homologous recombination is involved in the repair response of mammalian cells to low doses of tritium // Radiat. Res. 2008. Vol. 170. P. 172-83.Saintigny Y., Roche S., Meynard D., Lopez B.S. Homologous recombination is involved in the repair response of mammalian cells to low doses of tritium // Radiat. Res. 2008. Vol. 170. P. 172-83.Озеров И.В., Осипов А.Н. Кинетическая модель репарации двунитевых разрывов ДНК в первичных фибробластах человека при действии редкоионизирующего излучения с различной мощностью дозы // Компьютерные исследования и моделирование. 2015. Т.7. № 1. С. 159-176.Ozerov I.V., Osipov A.N. Kinetic model of repair of DNA double-strand breaks in primary human fibroblasts under the action of rare-ionizing radiation with different dose rates // Kompiuternye issledovania i modelirovanie (‘Computer Studies and Modeling’). 2015. Vol. 7. № 1. P. 159-176. (In Russian. English abstracts. PubMed)Озеров И.B., Еремин П.С., Осипов А.Н. и соавт. Особенности изменения числа фокусов белков γH2AX и Rad51 в фибробластах кожи человека, подвергавшихся пролонгированному воздействию низкоинтенсивного рентгеновского излучения // Саратовский научно-мед. журнал. 2014. Т. 10. № 4. С. 739-743.Ozerov I.V., Eremin P.S., Osipov A.N. et al. Features of changes in the number of foci of proteins γH2AX and Rad51 in human fibroblasts subjected to prolonged exposure to low-intensity X-rays // Saratov Scientific-Medical Journal. 2014. Vol. 10. № 4. P. 739-743. (In Russian. English abstracts. PubMed)Озеров И.B., Бушманов А.Ю., Анчишкина Н.А и соавт. Индукция и репарация двунитевых разрывов ДНК в клетках линии V79 при длительном воздействии низкоинтенсивного γ-излучения // Саратовский научно-мед. журнал. 2013. Т. 9. № 4. С. 787-791.Ozerov I.V., Bushmanov A.Yu., Anchishkina N.A. et al. Induction and repair of DNA double-strand breaks in V79 cells under long-term exposure to low-intensity γ-radiation // Saratov Scientific-Medical Journal. 2013. Vol. 9. № 4. P. 787-791. (In Russian. English abstracts. PubMed)Duque A., Rakic P. Different effects of BrdU and 3H-Thymidine incorporation into DNA on cell proliferation, position and fate // J. Neurosci. 2011. Vol. 31. № 42. P. 15205-15217.Duque A., Rakic P. Different effects of BrdU and 3H-Thymidine incorporation into DNA on cell proliferation, position and fate // J. Neurosci. 2011. Vol. 31. № 42. P. 15205-15217.Hoy C.A, Lewis E.D, Schimke R.T. Perturbation of DNA replication and cell cycle progression by commonly used [3H]thymidine labeling protocols // Mol. Cell Biol. 1990 Apr. Vol. 10. № 4. P. 1584-1592.Hoy C.A, Lewis E.D, Schimke R.T. Perturbation of DNA replication and cell cycle progression by commonly used [3H]thymidine labeling protocols // Mol. Cell Biol. 1990 Apr. Vol. 10. № 4. P. 1584-1592.Hu V.W., Black G.E., Torres-Duarte A., Abramson F.P. 3H-thymidine is a defective tool with which to measure rates of DNA synthesis // FASEB J. 2002, Vol. 16. № 11. P. 1456-1457.Hu V.W., Black G.E., Torres-Duarte A., Abramson F.P. 3H-thymidine is a defective tool with which to measure rates of DNA synthesis // FASEB J. 2002, Vol. 16. № 11. P. 1456-1457.Jurikova M.. Danihel L., Polak S.. Varga I. Ki67, pcna, and mcm proteins. Markers of proliferation in the diagnosis of breast cancer // Acta Histochemica 2016. Vol. 118. P. 544-552.Jurikova M.. Danihel L., Polak S.. Varga I. Ki67, pcna, and mcm proteins. Markers of proliferation in the diagnosis of breast cancer // Acta Histochemica 2016. Vol. 118. P. 544-552.