Совершенствование средств оценки показателей микробиоценоза животных, диагностики, профилактики, лечения незаразных и инфекционных болезней является наиболее значимой задачей, стоящей на сегодняшний день перед ветеринарными специалистами, микробиологами и биотехнологами. Одним из важных элементов в лабораторной диагностике инфекционных болезней является выделение возбудителя в чистой культуре на питательных средах [6, 7, 8]. Среды должны иметь рецептуру, оптимально обеспечивающую рост и размножение микроорганизмов определённого вида или семейства. Интенсивное развитие биотехнологии и микробиологии позволяет сегодня разрабатывать новые питательные среды и модифицировать уже имеющиеся рецептуры сред [1, 2, 3, 4, 5]. В связи с этим, конструирование и производство качественных питательных сред, разработка рецептур новых микробиологических сред и совершенствование уже применяемых сред ‒ одно из важных направлений работы в области биотехнологии, медицинской и ветеринарной микробиологии [6, 7, 8, 9]. Цель исследований – совершенствование селективной добавки к элективным средам для выделения энтеробактерий.  Задачи исследований − выявить чувствительность выделенных штаммов энтеробактерий к антибиотикам; разработать новую селективную добавку с антибиотиками к питательной среде Drigalski Lactose Agar.Материал и методы исследования. Объект исследований – новая селективная добавка с антибиотиками к питательной среде Drigalski Lactose Agar. Материал для исследований – 253 изолята бактерий, выделенных из кишечного микробиотопа различных видов животных. Исследования проводили в период с 2010 по 2017 гг.Суспензию биоматериала для получения роста культур энтеробактерий высевали на дифференциально-диагностические и селективно-элективные питательные среды.  Суспензию материала распределяли одноразовым стерильным микробиологическим г-образным шпателем по поверхности среды в чашке Петри и инкубировали в термостате при 25-300С,  370С  48-72 ч [10]. Чистые культуры микроорганизмов идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, серологическим свойствам. Количество выросших колоний микроорганизмов (КОЕ – колониеобразующая единица) на плотных питательных средах проводили общепринятым методом на приборе ПСБ (прибор счёта бактерий).Определение чувствительности выделенных нами от различных животных изолятов энтерорбактеий к антимикробным препаратам проводили диско-диффузионным методом на среде АГВ и агаре Мюллера-Хинтона. Подбор антибиотиков и создание селективной добавки с антибиотиками к среде Drigalski Lactose Agar осуществляли методом серийных разведений в бульоне МПБ и на Эндо агаре. Результаты исследований обрабатывали статистически по общепринятой методике с использованием компьютерной программы Microsoft Excel.Результаты исследований. В процессе разработки новой селективной добавки к питательной среде Drigalski Lactose Agar выявлялась чувствительность энтеробактерий к антимикробным препаратам. Результаты определения антибиотикочувствительности энтеробактерий к пенициллинам (ампициллин № 1, бензилпенициллин № 2, амоксициллин № 3, карбенициллин № 4 и пиперациллин № 5) и аминогликозидам посредством постановки диско-диффузионного теста представлены в таблицах 1 и 2.Таблица 1Антибиотикочувствительность энтеробактерий к пенициллинам  Чистая культураэнтеробактерийПенициллины (значение зоны ингибиции роста (мм))№ 1№ 2№ 3№ 4№ 4Escherichia coli16±0,28±0,117±0,422±0,521±0,6Shigella dysenteriae 18±0,43±0,0718±0,623±0,822±0,5Shigella flexneri19±0,62±0,0519±0,725±0,521±0,9Salmonella Enteritidis18±0,43±0,0617±0,924±0,723±0,8Klebsiella oxytoca20±1,63±0,0421±0,824±0,925±0,7Proteus vulgaris17±1,30,7±0,0820±1,226±1,628±1,4Providencia alcalifaciens15±0,41±0,0418±1,422±1,820±1,2Hafnia alvei20±1,80,4±0,319±1,525±1,828±1,7Morganella morganii18±2,50,5±0,0620±1,323±1,627±1,5Enterobacter cloacae22±1,50,8±0,222±1,428±1,824±2,3Citrobacter freundii22±0,84±0,121±1,225±1,633±2,2Serratia marcescens18±0,42±0,0817±1,521±1,423±1,8Erwinia amylovora24±3,80,4±0,0528±1,730±2,337±2,5Kluyvera cryocrescens17±1,30,5±0,0716±1,821±1,524±2,0Yersinia enterocolitica3±0,45±0,0615±0,821±1,223±1,3 Таблица 2Антибиотикочувствительность энтеробактерий к аминогликозидам  Чистая культура энтеробактерийАминогликозиды (значение зоны ингибиции роста (мм))стрептомицинканамицинамикацингентамицинEscherichia coli16±0,217±0,118±0,415±0,3Shigella dysenteriae 19±0,722±0,824±1,220±0,6Shigella flexneri17±0,924±1,520±1,422±1,3Salmonella Enteritidis15±0,519±0,622±1,618±0,2Klebsiella oxytoca19±1,723±1,518±0,925±2,3Proteus vulgaris17±1,620±1,317±1,323±2,8Providencia alcalifaciens18±1,219±0,826±1,721±2,2Hafnia alvei18±1,219±1,721±1,422±2,6Morganella morganii19±1,822±2,619±1,623±3,2Enterobacter cloacae19±1,422±1,223±1,720±1,3Citrobacter freundii16±0,817±0,920±0,819±0,5Serratia marcescens18±0,319±0,517±1,620±0,8Erwinia amylovora22±2,424±4,222±1,419±2,6Kluyvera cryocrescens15±1,219±0,726±1,822±1,6Yersinia enterocolitica10±0,323±0,716±1,225±0,8 Наибольшую антимикробную активность в отношении всех выделенных культур энтеробактерий проявляли карбенициллин из группы карбоксипенициллинов и пиперациллин из группы уреидопенициллинов, канамицин, амикацин и гентамицин. Высокую устойчивость энтеробактерии проявляли к бензилпенициллину из группы естественных пенициллинов и к стрептомицину. Результаты определения антибиотикочувствительности энтеробактерий к цефалоспоринам (цефалотин № 1, цефтриаксон (лонгацеф) № 2, цефотаксим (клафоран) № 3, цефепим № 4, цефозопран № 5 и цефквин № 6) в результате постановки диско-диффузионного теста представлены в таблице 3. Результаты определения чувствительности энтеробактерий к к тетрациклину представлены в таблице 4.Таблица 3Антибиотикочувствительность энтеробактерий к цефалоспоринам Чистая культураэнтеробактерийЦефалоспорины (значение зоны ингибиции роста (мм)) № 1№ 2№ 3№ 4№ 5№ 6Escherichia coli10±0,521±1,223±1,725±1,923±1,622±1,5Shigella dysenteriae 12±0,816±1,518±0,923±2,221±1,220±1,2Shigella flexneri10±1,317±0,919±1,824±1,420±1,319±0,7Salmonella Enteritidis12±0,918±1,718±0,626±1,718±0,918±0,5Klebsiella oxytoca8±0,520±1,917±1,332±2,325±1,723±1,9Proteus vulgaris10±1,517±0,722±2,526±1,222±1,221±2,3Providencia alcalifaciens12±0,722±1,221±2,228±1,919±0,720±0,7Hafnia alvei10±0,523±2,323±1,530±1,623±1,422±1,8Morganella morganii11±0,621±1,820±0,734±2,326±1,728±2,2Enterobacter cloacae10±0,420±2,417±0,433±2,622±1,224±1,6Citrobacter freundii13±1,718±0,816±0,930±1,819±1,925±2,4Serratia marcescens12±0,816±0,519±1,238±3,226±1,330±3,4Erwinia amylovora10±0,521±0,921±1,837±2,827±1,431±2,6Kluyvera cryocrescens8±0,320±1,323±2,531±2,622±2,326±1,8Yersinia enterocolitica10±0,715±0,620±1,727±1,820±1,822±1,5 Таблица 4Антибиотикочувствительность энтеробактерий Чистая культура энтеробактерийАнтибиотики (значение зоны ингибиции роста (мм)) тетрациклиндоксициклинполимиксин ВхлорамфениколEscherichia coli17±0,316±0,818±1,518±0,7Shigella dysenteriae 19±1,218±0,510±0,325±2,3Shigella flexneri20±1,615±0,412±0,820±2,6Salmonella Enteritidis18±0,914±0,710±0,622±1,8Klebsiella oxytoca24±1,813±0,919±1,331±2,5Proteus vulgaris27±2,216±0,58±0,526±2,5Providencia alcalifaciens22±1,420±1,210±1,820±2,3Hafnia alvei20±0,818±0,712±1,223±1,4Morganella morganii18±1,524±1,68±0,322±2,4Enterobacter cloacae19±0,726±2,410±1,621±1,3Citrobacter freundii25±2,328±2,718±1,419±1,5Serratia marcescens28±1,616±1,312±1,223±1,6Erwinia amylovora22±1,522±2,613±0,826±3,6Kluyvera cryocrescens20±1,318±0,514±0,925±1,8Yersinia enterocolitica10±0,534±2,313±1,527±2,7 Наибольшую антимикробную активность в отношении энтеробактерий проявляли цефепим, тетрациклин, доксициклин и хлорамфеникол. Наибольшая устойчивость энтеробактерии выявлена к цефалотину и к полимиксину В. Результаты определения антибиотикочувствительности энтеробактерий к хинолонам (налидиксовая кислота (невиграмон) № 1, офлоксацин (таривид) № 2 и ципрофлоксацин № 3) представлены в таблице 5. Чувствительность энтеробактерий к метронидазолу№ 1,  фурадонину № 2, ко-тримоксазолу № 3 и триметоприму № 4 приведена в таблице 6.Наибольшую антимикробную активность в отношении энтеробактерий проявляла налидиксовая кислота и триметоприм. Относительно хорошая устойчивость у большинства энтеробактерии выявлена к офлоксацину (таривид) и метронидазолу.  В ходе выбора селективных компонентов рассматривали антибактериальные препараты, эффективные в отношении сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры. Были выбраны из группы гликопептидов ванкомицин, из группы оксазолидинонов линезолид, а из группы кетолидов телитромицин.Таблица 5Антибиотикочувствительность энтеробактерий к хинолонам Чистая культура энтеробактерийХинолоны (значение зоны ингибиции роста (мм)) № 1№ 2№ 3Escherichia coli28±2,215±1,626±1,8Shigella dysenteriae 20±1,316±0,823±1,5Shigella flexneri24±1,820±1,523±2,5Salmonella Enteritidis27±1,522±1,819±1,2Klebsiella oxytoca33±2,418±0,725±1,6Proteus vulgaris22±2,815±0,520±1,5Providencia alcalifaciens20±1,220±2,424±0,8Hafnia alvei28±3,424±3,220±0,6Morganella morganii20±3,817±0,529±1,4Enterobacter cloacae26±2,623±2,519±0,5Citrobacter freundii21±1,228±2,718±0,7Serratia marcescens24±1,716±2,222±1,8Erwinia amylovora33±3,619±1,620±1,3Kluyvera cryocrescens23±1,526±1,821±0,5Yersinia enterocolitica37±2,820±1,245±3,6 Таблица 6Антибиотикочувствительность энтеробактерийЧистая культура энтеробактерийАнтибиотики (значение зоны ингибиции роста (мм)) № 1№ 2№ 3№ 4Escherichia coli8±0,818±1,217±0,526±2,3Shigella dysenteriae 6±0,522±1,920±1,228±2,8Shigella flexneri5±0,426±2,225±1,530±2,6Salmonella Enteritidis8±1,415±0,820±1,622±1,8Klebsiella oxytoca10±1,68±1,825±3,224±1,5Proteus vulgaris12±1,812±1,325±3,828±2,5Providencia alcalifaciens8±0,820±1,425±2,625±1,8Hafnia alvei10±1,218±2,223±2,523±2,0Morganella morganii12±1,510±3,527±4,526±1,7Enterobacter cloacae10±1,48±1,426±1,927±2,2Citrobacter freundii8±0,520±1,625±1,530±2,4Serratia marcescens8±1,219±0,622±0,735±3,4Erwinia amylovora10±2,212±1,337±6,234±2,6Kluyvera cryocrescens12±2,618±1,221±0,932±3,6Yersinia enterocolitica10±1,528±0,621±0,730±2,7 Ванкомицин является антибиотиком, ингибирующим биосинтез клеточной стенки бактерий, блокируя синтез пептидогликана. Ванкомицин проявляет активность в отношении большинства грамположительных микроорганизмов, особенно в отношении Staphylococcus spp., Streptococcus spp. и Enterococcus spp., в том числе проявляющих устойчивость к антибактериальным препаратам других групп. Устойчивой резистентности к ванкомицину у грамположительных микроорганизмов не выявлено, за исключением единичных клинических случаев. Ванкомицин не имеет перекрёстной резистентности с другими антибиотиками.Линезолид ингибирует биосинтез микробного белка по принципиально новому механизму действия, чем существенно превосходит по эффективности макролиды, линкозамиды, хлорамфеникол, тетрациклины и аминогликозиды. Линезолид высоко активен в отношении полирезистентных Staphylococcus spp. и Enterococcus spp., а также в отношении Streptococcus pneumonia, Bacillus spp., Corynebacterium spp., Listeria monocytogenes, Mycobacterium tuberculosis и Rhodococcus spp., Clostridium perfringens, C. difficile, Peptostreptococcus spp., Bacteroides fragilis. К линезолиду проявляют чувствительность и грамотрицательные бактерии Haemophilus influenza, Moraxella catarrhalis, Legionella spp., Bordetella pertussis и B. parapertussis. Линезолид обладает достаточно высокой активностью в отношении чувствительных и устойчивых грамположительных бактерий к оксациллину, аминогликозидам, фторхинолонам, макролидам и гликопептидам.Телитромицин ингибирует биосинтез микробного белка у грамположительных бактерий (прежде всего у Staphylococcus spp. и Streptococcus spp.), проявляет активность в отношении некоторых грамотрицательных бактерий (Neisseria spp., Haemophilus spp., Legionella spp., Helicobacter spp.), а также высокоактивен в отношении Chlamydia spp., Mycoplasma spp. Телитромицин (кетолид) сохраняет активность в отношении всех штаммов бактерий, устойчивых к макролидам и линкосамидам.В результате минимальная подавляющая концентрация (МПК) ванкомицина и телитромицина для большинства культур энтеробактерий составляла 0,063 г/дм3, а МПК линезолида была на уровне 0,031 г/дм3. Обильный рост культур энтеробактерий наблюдался при концентрации ванкомицина и телитромицина 0,008 г на дм3 среды, а линезолида в концентрации 0,004 на дм3 среды.В итоге разработанная селективная добавка к питательной среде Drigalski Lactose Agar включает ванкомицин, линезолид и телитромицин (табл. 7). В связи с этим было решено присвоить данной добавке следующее наименование «Селективная добавка ВЛТ».  Таблица 7Состав селективной добавки ВЛТПрепараты антибактериальныеКонцентрация, г/дм3Ванкомицин0,008 Линезолид0,004 Телитромицин0,008  Заключение. Наибольшую антимикробную активность в отношении всех выделенных культур энтеробактерий проявляли карбенициллин 30±2,3 из группы карбоксипенициллинов и пиперациллин 37±2,5 из группы уреидопенициллинов, канамицин 24±1,5, амикацин 26±1,7 и гентамицин 25±0,8, цефепим 38±3,2 из группы цефалоспоринов IV поколения, тетрациклин 28±1,6, доксициклин 34±2,3 и хлорамфеникол 31±2,5, налидиксовая кислота 37±2,8, триметоприм 35±3,4. Высокую устойчивость энтеробактерии проявляли к бензилпенициллину из группы естественных пенициллинов, к стрептомицину, цефалотину из группы цефалоспоринов I поколения, к полимиксину В, к офлоксацину (таривид) и метронидазолу. В ходе выбора селективных компонентов рассматривали антибактериальные препараты, эффективные в отношении сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры. Были выбраны из группы гликопептидов ванкомицин, из группы оксазолидинонов линезолид,  из группы кетолидов телитромицин. В состав разработанной селективной добавки к среде Drigalski Lactose Agar введены антибиотики ванкомицин и телитромицин в дозе 0,008 г/дм3, линезолид в дозе 0,004 г/дм3 среды.