Увеличение срока службы собак является актуальной темой, поскольку на ветеринарное обслуживание, воспитание и обучение только одной собаки тратится огромное количество времени, средств и задействуется целый ряд специалистов. При этом у каждого животного своя узкая специализация. Это обуславливает использование большого человеческого и экономического ресурса. Необходимо задействовать эффективные, апробированные и экономически оправданные средства различного происхождения. Одним из таких средств является дигидрокверцетин. Биофлавоноид оказывает бактерицидное воздействие на патогенную  и условно-патогенную микрофлору бактерии группы кишечной палочки, сальмонеллы, иерсинии и другие энтеробактерии, стафилококки и стрептококки, листерии и многих других представителей транзиторной микрофлоры, включая микрогрибы [3, 4, 5]. Биофлавоноид дигидрокверцетин (ДГК, DHQ) с химической формулой C15H12O7 в мире известен как Taxifolin (Таксифолин) и считается уникальным антиоксидантом, природным акцептором свободных радикалов кислорода. Дигидрокверцетин является своего рода мощным гепатопротектором, радиопротектором, обладает противовоспалительным, обезболивающим и, самое главное, иммунокоррегирующим свойствами [4, 5]. Пробиотики и синбиотики повышают концентрацию бифидобактерий и лактобацилл в микробиоценозе организма животных и человека [6, 7]. Важным является активация биологических свойств антагонистически активных микроорганизмов, например, энтерококков кишечной микрофлоры животных [10].Цель исследований – нормализация микрофлоры кишечника служебных собак в структуре ГУ МВД России путем применения синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина.Задачи исследований ‒ выделение и идентификация у собак микрофлоры желудочно-кишечного тракта; изучение морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, серологических свойств микроорганизмов; определение факторов патогенности и персистенции микроорганизмов при использовании комплекса препаратов экспериментального синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина.Материал и методы исследований. Работа проводилась в условиях ГУ МВД России по Самарской области. В Центре кинологической службы г. Самары 30 животных. Лабораторные исследования проводились на базе ФГБОУ ВО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» в 2018 г. Объект исследований – служебные собаки породы немецкая и бельгийская овчарка. Первую группу (контрольную) сформировали из животных, имеющих основной рацион и режим тренировок. Всего в группе было 15 собак (10 голов породы немецкая овчарка, 5 голов породы бельгийская овчарка). Вторую группу (опытную) сформировали из собак, имеющих основной рацион с дополнением дачи экспериментального синбиотика БЛЭД-1 и препарата дигидрокверцетина. Всего в группе15 собак (10 голов породы немецкая овчарка, 5 голов породы бельгийская овчарка).  Условия кормления, содержания и режим тренировок у собак контрольной и опытной групп были одинаковыми. Материал для исследований – пробы фекалий собак.  Экспериментальный синбиотик с инулином и антиоксидантами  (дигидрокверцетином и селеном) БЛЭД-1 представляет собой концентрированную взвесь живых микроорганизмов-продуцентов,  антиоксиданта и селена. Синбиотик производится согласно ТУ.Пробы фекалий от животных отбирали до утреннего кормления и начала тренировок. Из проб фекалий готовили баксуспензию в последовательных десятикратных разведениях.  Инокулят высевали в чашки Петри и пробирки на дифференциально-диагностические и элективно-селективные среды. Посевы культивировали при 25-37оС в течение 48-72 ч с использованием одноразового стерильного микробиологического г-образного шпателя [9]. Чистые культуры микроорганизмов идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам с использованием штатива для уленгутовских и микроцентрифужных пробирок [8]. Биохимические свойства микроорганизмов изучали постановкой пёстрого ряда со средами Гисса, в пластинах ПБДЭ (пластина для биохимической дифференциации энтеробактерий) и в других специфических тестах, по общепринятым методикам. Определение факторов патогенности микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с помощью программ «Биостатистика» и Microsoft Office Excel 2007.Результаты исследований. Установлено, что общее число микроорганизмов в 1 г фекалий у собак контрольной группы составляло 11,19х1010±0,16. Среди них количество транзиторных микроорганизмов составляло 1,24х106±0,08. Видовой состав микробиоценоза желудочно-кишечного тракта собак контрольной группы состоял из резидентных и транзиторных видов микроорганизмов (табл. 1, 2).Таблица 1 Резидентные микроорганизмы в микробиоценозе желудочно-кишечного трактасобак контрольной группыКультура микроорганизмовКоличество микроорганизмов, 10nEnterococcus faecium5,13х108±0,21Enterococcus faecalis2,87х108±0,08Enterococcus hirae0,82х108±0,06Enterococcus flavescens0,52х108±0,04Enterococcus casseliflavus0,22х108±0,03Bacteroides fragilis3,82х106±0,12Bifidobacterium bifidum6,58х1010±0,24Lactobacillus delbrueckii3,98х1010±0,72Micrococcus luteus6,28х104±0,46Streptococcus canis7,42х104±0,36Prevotella oralis5,38х105±0,28Escherichia coli5,64х104±0,44Serratia marcescens3,74х105±0,12 Таблица 2 Транзиторные микроорганизмы в микробиоценозе желудочно-кишечного трактасобак контрольной группыКультура микроорганизмовКоличество микроорганизмов, 10n12Citrobacter freundii2,48х104±0,42Kluyvera cryocrescens2,86х104±0,12Providencia alcallifaciens3,88х104±0,15Proteus vulgaris4,02х103±0,40Morganella morganii5,04х103±0,18Hafnia alvei5,32х104±0,36Окончание табл. 212Erwinia amylovora3,42х104±0,08Enterobacter cloacae5,14х104±0,28Klebsiella oxytoca4,06х104±0,42Yersinia enterocolitica0,22х103±0,02Salmonella enteritidis1,24х103±0,06Helicobacter pylori5,26х104±0,32Staphylococcus aureus2,74х105±0,12Streptococcus pneumoniae6,38х105±0,16 В контрольной группе в ходе изучения микрофлоры кишечника у двух собак была выделена культура патогенных стафилококков Staphylococcus aureus, сапрофитная культура микрококков Micrococcus luteus, условно-патогенная культура превотелл Prevotellaoralis. В ходе изучения у всех собак была выделена условно-патогенная культура стрептококков Streptococcus pneumoniae и условно-патогенная культура Streptococcus canis. В ходе исследования фекалий у четырёх собак контрольной группы выделена условно-патогенная культура Helicobacter pylori, у всех собак выявлены условно-патогенные энтеробактерии Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae, а также энтерококки, сапрофиты лактобациллы Lactobacillus delbrueckii, бифидобактерий Bifidobacterium bifidum. Данные культуры микроорганизмов также выявлялись авторами ранее в ходе исследования резидентной и транзиторной микрофлоры собак в условиях Самарской области [1, 2].В опытной группе собак общее число микроорганизмов в 1 г фекалий  было на уровне 16,69х1010±0,23. Среди них количество транзиторных микроорганизмов составляло 2,51х105±0,08. Видовой состав микробиоценоза желудочно-кишечного тракта собак опытной группы представлен в таблицах 3 и 4.Таблица 3Резидентные культуры микроорганизмов в видовом составе микробиоценозажелудочно-кишечного тракта  служебных собак опытной группыКультура микроорганизмовКоличество микроорганизмов, 10nEnterococcus faecium5,72х108±0,58Enterococcus faecalis3,08х108±0,12Enterococcus hirae1,52х108±0,04Enterococcus flavescens0,74х108±0,02Enterococcus casseliflavus0,44х108±0,04Bacteroides fragilis3,82х106±0,26Bifidobacterium bifidum9,52х1010±0,64Lactobacillus delbrueckii6,74х1010±0,26 Micrococcus luteus7,16х105±0,32Prevotella oralis3,14х103±0,52Escherichia coli5,22х104±0,23Serratia marcescens4,62х105±0,18Leptotrichia buccalis4,16х104±0,22 Таблица 4Транзиторные микроорганизмы в микробиоценозе желудочно-кишечного трактасобак опытной группыКультура микроорганизмовКоличество микроорганизмов, 10nCitrobacter freundii3,02х104±0,12Kluyvera cryocrescens2,82х104±0,24Providencia alcallifaciens3,44х104±0,28Proteus vulgaris4,26х103±0,38Morganella morganii4,12х103±0,12Hafnia alvei3,74х104±0,38Erwinia amylovora3,54х104±0,20Enterobacter cloacae5,06х104±0,18Klebsiella oxytoca2,63х104±0,08Yersinia enterocolitica0,26х103±0,02Salmonella enteritidis0,45х103±0,08В опытной группе у собак в ходе изучения микрофлоры кишечника была выделена сапрофитная культура микрококков Micrococcus luteus, условно-патогенная культура превотелл Prevotella oralis,условно-патогенная культура лептотрихий Leptotrichia buccalis. Культура патогенных стафилококков Staphylococcus aureus выделена не была.У собак опытной группы в пробах фекалий условно-патогенная культура Helicobacter pylori отсутствовала, были выделены условно-патогенные энтеробактерии Escherichia coli, Enterobacter cloacae, энтерококки, сапрофиты лактобациллы Lactobacillus delbrueckii и бифидобактерии Bifidobacterium bifidum.В ходе исследования биохимических и серологических свойств у культур энтерококков, выделенных авторами от служебных собак, желатиназная активность и гемолитическая активность не выявлена. Это свидетельствует об отсутствии данных факторов патогенности (вирулентности) у выделенных энтерококков. К факторам патогенности (вирулентности) относят определённую группу протеолитических ферментов, продуцируемыми энтерококками. Высокая активность протеолитических ферментов у представителей рода Enterococcus является важнейшим инструментом антагонистической способности по отношению к патогенным микроорганизмам. В ходе исследования установлено, что все выделенные и идентифицированные культуры энтерококков обладали протеолитической активностью (табл. 5, 6). При этом у собак опытной группы протеолитическая активность энтерококков была менее выражена, чем у энтерококков собак контрольной группы.Таблица 5Протеолитическая активность культур энтерококков у собак контрольной группыКультура Enterococcus sp.Протеолитическая активность, мг∙мл/минEnterococcus faecium0,96±0,016Enterococcus hirae0,58±0,012Enterococcusfaecalis0,74±0,014Enterococcus flavescens0,68±0,012Enterococcus casseliflavus0,42±0,024 Таблица 6Протеолитическая активность культур энтерококков у собак опытной группыКультура Enterococcus sp.Протеолитическая активность, мг∙мл/минEnterococcus faecium0,62±0,004Enterococcus hirae0,34±0,008Enterococcus faecalis0,56±0,006Enterococcus flavescens0,45±0,005Enterococcus casseliflavus0,27±0,003 Среди факторов персистенции антилизоцимная и антикарнозиновая активность выявлены только у культур энтерококков. Основными показателями, определяющими персистентные свойства микроорганизмов, являются антилизоцимная активность, антикарнозиновая активность и способность к образованию биоплёнок.В результате исследования антилизоцимной активности у представителей рода  Enterococcus  выявлено, что данный признак встречался у 100% изолятов, выделенных от служебных собак. Уровень проявления антилизоцимной активности был более высоким у изолятов Enterococcus hirae, а наименьшим – у изолятов Enterococcus casseliflavus (табл. 7, 8). При этом у собак опытной группы антилизоцимная активность энтерококков была меньше по сравнению с антилизоцимной активностью энтерококков собак контрольной группы.Таблица 7Антилизоцимная активность энтерококков, выделенных от собак контрольной группыКультура Enterococcus sp.Антилизоцимная активность, мкг/мл∙едEnterococcus faecium2,37±0,018Enterococcus hirae3,46±0,004Enterococcus faecalis2,16±0,008Enterococcus flavescens1,68±0,012Enterococcus casseliflavus1,25±0,007 Таблица 8Антилизоцимная активность энтерококков, выделенных от собак опытной группыКультура Enterococcus sp.Антилизоцимная активность мкг/мл∙едEnterococcus faecium1,85±0,012Enterococcus hirae2,58±0,010Enterococcus faecalis1,63±0,009Enterococcus flavescens1,22±0,008Enterococcus casseliflavus0,54±0,002 Выживание условно-патогенных бактерий реализуется через их способность к адаптации и инактивации защитных свойств макроорганизма.  Дипептид природного происхождения карнозин(β-аланил L-гистидин) является одним из основных факторов неспецифической реактивности организма человека и животных. Все изоляты энтерококков, выделенные от служебных собак, обладали антикарнозиновой активностью. Уровень проявления антикарнозиновой активности был более высоким у изолятов Enterococcus hirae, а наименьшим – у изолятов Enterococcus casseliflavus(табл. 9, 10). Антикарнозиновая активность энтерококков собак опытной группы была менее выраженной по сравнению с антикарнозиновой активностью энтерококков собак контрольной группы.Таблица 9Антикарнозиновая активность культур энтерококков у собак контрольной группыКультура Enterococcus sp.Антикарнозиновая активность, мг/млEnterococcus faecium2,76±0,015Enterococcus hirae3,42±0,014Enterococcus faecalis2,47±0,013Enterococcus flavescens1,36±0,010Enterococcus casseliflavus1,28±0,008 Таблица 10Антикарнозиновая активность культур энтерококков у собак опытной группыКультура Enterococcus sp.Антикарнозиновая активность мг/млEnterococcus faecium1,43±0,012Enterococcus hirae2,38±0,016Enterococcus faecalis1,56±0,015Enterococcus flavescens1,08±0,012Enterococcus casseliflavus0,32±0,002 Одним из важнейших биологических свойств микроорганизмов, способствующих их адаптации и переживаемости в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта животных и человека, является способность к образованию биоплёнок. Способность к образованию биоплёнок выявлена у всех резидентных микроорганизмов, идентифицированных у собак. При этом способность к образованию биоплёнок у микроорганизмов собак опытной группы была значительно выше, чем у микробов собак контрольной группы (табл. 11, 12). Таблица 11Способность образовывать биоплёнки микробами у собак контрольной группыМикроорганизмыСпособность образовывать биоплёнки, %Enterococcus faecium25,34±1,38Enterococcus hirae41,48±1,55Enterococcus faecalis21,44±1,46Enterococcus flavescens19,82±1,16Enterococcus casseliflavus18,22±1,08Bacteroides fragilis15,24±1,06Bifidobacterium  bifidum67,38±2,64Lactobacillus delbrueckii73,62±3,18Micrococcus luteus31,15±2,83Streptococcus canis18,27±1,52Prevotella oralis16,38±1,04Escherichia coli48,77±2,59Serratia marcescens28,45±1,72Таблица 12Способность образовывать биоплёнки микроорганизмами у собак опытной группыМикроорганизмыСпособность образовывать биоплёнки, %Enterococcus faecium37,12±1,45Enterococcus hirae63,74±3,63Enterococcus faecalis42,78±2,33Enterococcus flavescens30,58±1,68Enterococcus casseliflavus33,67±1,92Bacteroides fragilis20,13±1,34Bifidobacterium  bifidum80,34±2,18Lactobacillus delbrueckii86,12±3,73Micrococcus luteus38,45±2,13Streptococcus canis22,64±1,33Prevotella oralis20,19±1,59Escherichia coli57,13±2,44Serratia  marcescens35,62±1,98Leptotrichia  buccalis29,43±1,75 Способность к образованию биоплёнок была наиболее высокой у Bifidobacterium bifidumи Lactobacillus delbrueckii. Способность к образованию биоплёнок в результате применения дигидрокверцетина и синбиотика БЛЭД-1 у собак опытной группы у культуры Bifidobacterium bifidum составила 80,34±2,18 и Lactobacillus delbrueckii − 86,12±3,73, у собак контрольной группы была ниже:у культуры Bifidobacterium bifidum – 67,38±2,64 и Lactobacillus delbrueckii − 73,62±3,18.Заключение. Комплекс препаратов синбиотик БЛЭД-1 и дигидрокверцетин оказал положительное влияние на микрофлору организма служебных собак. Это привело к подавлению жизнедеятельности транзиторных патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в микробиоценозе животных. В результате у собак возросла численность полезной сапрофитной микрофлоры (Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus delbrueckii), участвующей в процессе обмена энергии и веществ, а также оказывающей, в том числе, антиоксидантное и бактерицидное действие на стороннюю микрофлору.