Acta biomedica scientifica Acta biomedica scientifica Acta biomedica scientifica 2541-9420 2587-9596 16452 10.12737/article_590823a4895537.04307905 новые технологии Innovative Technologies новые технологии ACTIVATED PRODUCING HOCL NEUTROPHILS REVEALED BY FLOW CYTOMETRY AND CONFOCAL MICROSCOPY WITH CELESTINE BLUE B АКТИВИРОВАННЫЕ НЕЙТРОФИЛЫ, ПРОДУЦИРУЮЩИЕ HOCL, ВЫЯВЛЯЮЩИЕСЯ ПРИ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И КОНФОКАЛЬНОЙ МИКРОСКОПИИ С ПОМОЩЬЮ ЦЕЛЕСТИНОВОГО СИНЕГО В Козлов Станислав Олегович Kozlov Stanislav Olegovich slava7891@yandex.ru Кудрявцев Игорь Владимирович Kudryavtsev Igor Vladimirovich igorek1981@yandex.ru

кандидат биологических наук;

candidate of sciences in biology;

 Грудинина Наталья Андреевна Grudinina Natalya Andreevna strangecatnap@gmail.com

кандидат биологических наук;

candidate of sciences in biology;

 Костевич Валерия Александровна Kostevich Valeriya Aleksandrovna hfa-2005@yandex.ru Панасенко Олег Михайлович Panasenko Oleg Mikhaylovich o-panas@mail.ru

доктор биологических наук;

doctor of sciences in biology;

 Соколов Алексей Викторович Sokolov Aleksey Viktorovich biochemsokolov@gmail.com

доктор биологических наук;

doctor of sciences in biology;

 Васильев Вадим Борисович Vasilyev Vadim Borisovich vadim@biokemis.ru

доктор медицинских наук;

doctor of medical sciences;

 Институт экспериментальной медицины Санкт-Петербург Россия Институт экспериментальной медицины Saint-Petersburg Russian Federation Институт экспериментальной медицины Санкт-Петербург Россия Институт экспериментальной медицины Saint-Petersburg Russian Federation Институт экспериментальной медицины Санкт-Петербург Россия Институт экспериментальной медицины Saint-Petersburg Russian Federation Институт экспериментальной медицины Санкт-Петербург Россия Институт экспериментальной медицины Saint-Petersburg Russian Federation ФГБУ ФНКЦ физико-химической медицины ФМБА России Москва Россия ФГБУ ФНКЦ физико-химической медицины ФМБА России Moscow Russian Federation Институт экспериментальной медицины Россия Институт экспериментальной медицины Russian Federation Институт экспериментальной медицины Санкт-Петербург Россия Институт экспериментальной медицины Saint-Petersburg Russian Federation 1 3 86 91 https://zh-szf.ru/en/nauka/article/16452/view

HOCl образуется при стимуляции нейтрофилов благодаря активности миелопероксидазы. Для селективной спектрофотометрической детекции HOCl предложен целестиновый синий B (CB). Целью данной работы явилась разработка флуоресцентных методов оценки продукции HOCl нейтрофилами. Продукт реакции CB с HOCl флуоресцировал при 578 нм (возбуждение 487 нм). Методом конфокальной микроскопии получили изображения активированных нейтрофилов, окрашенных CB. При проточной цитометрии флуоресценция активированных 50 нМ PMA нейтрофилов была в 5 раз выше (p < 0,05), чем у клеток без активатора.

HOCl образуется при стимуляции нейтрофилов благодаря активности миелопероксидазы. Для селективной спектрофотометрической детекции HOCl предложен целестиновый синий B (CB). Целью данной работы явилась разработка флуоресцентных методов оценки продукции HOCl нейтрофилами. Продукт реакции CB с HOCl флуоресцировал при 578 нм (возбуждение 487 нм). Методом конфокальной микроскопии получили изображения активированных нейтрофилов, окрашенных CB. При проточной цитометрии флуоресценция активированных 50 нМ PMA нейтрофилов была в 5 раз выше (p < 0,05), чем у клеток без активатора.

 HOCl хлорноватистая кислота миелопероксидаза целестиновый синий B нейтрофилы конфокальная микроскопия проточная цитометрия флуоресценция

Панасенко О.М., Горудко И.В., Соколов А.В. Хлорноватистая кислота как предшественник свободных радикалов в живых системах // Успехи биологической химии. - 2013. - Т. 53. - С. 195-244. Panasenko OM, Gorudko IV, Sokolov AV (2013). Hypochlorous acid as a precursor of free radicals in living systems [Khlornovatistaya kislota kak predshestvennik svobodnykh radikalov v zhivykh sistemakh]. Uspekhi biologicheskoy khimii, (53), 195-244 Соколов А.В., Голенкина Е.А., Костевич В.А., Васильев В.Б., Судьина Г.Ф. Взаимодействие церулоплазмина и 5-липоксигеназы // Биохимия. - 2010. - Т. 75, № 12. -С. 1687-1694. Sokolov AV, Golenkina EA, Kostevich VA, Vasilyev VB, Sudyina GF (2010). Ceruloplasmin and 5-lipoxygenase interaction [Vzaimodeystvie tseruloplazmina i 5-lipoksigenazy]. Biokhimiya, 75 (12), 1464-1469. Dypbukt JM, Bishop C, Brooks WM, Thong B, Eriksson H, Kettle AJ (2005) A sensitive and selective assay for chloramine production by myeloperoxidase. Free Radical Biology and Medicine, (39), 1468-1477. Dypbukt JM, Bishop C, Brooks WM, Thong B, Eriksson H, Kettle AJ (2005) A sensitive and selective assay for chloramine production by myeloperoxidase. Free Radical Biology and Medicine, (39), 1468-1477. Flemmig J, Zschaler J, Remmler J, Arnhold J (2012). The fluorescein-derived dye aminophenyl fluorescein is a suitable tool to detect hypobromous acid (HOBr)-producing activity in eosinophils. Journal of Biological Chemistry, (287), 27913-27923. Flemmig J, Zschaler J, Remmler J, Arnhold J (2012). The fluorescein-derived dye aminophenyl fluorescein is a suitable tool to detect hypobromous acid (HOBr)-producing activity in eosinophils. Journal of Biological Chemistry, (287), 27913-27923. Franck T, Minguet G, Delporte C, Derochette S, Zouaoui Boudjeltia K, van Antwerpen P, Gach O, Deby-Dupont G, Mouithys-Mickalad A, Serteyn D (2015). An immunological method to combine the measurement of active and total myeloperoxidase on the same biological fluid, and its application in finding inhibitors which interact directly with the enzyme. Free Radical Research, (49), 790-799. Franck T, Minguet G, Delporte C, Derochette S, Zouaoui Boudjeltia K, van Antwerpen P, Gach O, Deby-Dupont G, Mouithys-Mickalad A, Serteyn D (2015). An immunological method to combine the measurement of active and total myeloperoxidase on the same biological fluid, and its application in finding inhibitors which interact directly with the enzyme. Free Radical Research, (49), 790-799. Huang J, Milton A, Arnold RD, Huang H, Smith F, Panizzi JR, Panizzi P (2016). Methods for measuring myeloperoxidase activity toward assessing inhibitor efficacy in living systems. Journal of Leukocyte Biology, (99), 541-548. Huang J, Milton A, Arnold RD, Huang H, Smith F, Panizzi JR, Panizzi P (2016). Methods for measuring myeloperoxidase activity toward assessing inhibitor efficacy in living systems. Journal of Leukocyte Biology, (99), 541-548. Malle E, Furtmüller PG, Sattler W, Obinger C (2007). Myeloperoxidase: a target for new drug development? British Journal of Pharmacology, (152), 838-854. Malle E, Furtmüller PG, Sattler W, Obinger C (2007). Myeloperoxidase: a target for new drug development? British Journal of Pharmacology, (152), 838-854. Sokolov AV, Kostevich VA, Kozlov SO, Donskyi IS, Vlasova II, Rudenko AO, Zakharova ET, Vasilyev VB, Panasenko OM (2015). Kinetic method for assaying the halogenating activity of myeloperoxidase based on reaction of celestine blue B with taurine halogenamines. Free Radical Research, (46), 777-789. Sokolov AV, Kostevich VA, Kozlov SO, Donskyi IS, Vlasova II, Rudenko AO, Zakharova ET, Vasilyev VB, Panasenko OM (2015). Kinetic method for assaying the halogenating activity of myeloperoxidase based on reaction of celestine blue B with taurine halogenamines. Free Radical Research, (46), 777-789. Weiss SJ, Klein R, Slivka A, Wei M (1982). Chlorination of taurine by human neutrophils. Evidence for hypochlorous acid generation. Journal of Clinical Investigation, (70), 598-607. Weiss SJ, Klein R, Slivka A, Wei M (1982). Chlorination of taurine by human neutrophils. Evidence for hypochlorous acid generation. Journal of Clinical Investigation, (70), 598-607. Urban CF, Ermert D, Schmid M, Abu-Abed U, Goosmann C, Nacken W, Brinkmann V, Jungblut PR, Zychlinsky A (2009). Neutrophil extracellular traps contain calprotectin, a cytosolic protein complex involved in host defense against Candida albicans. PLoS Pathogens, (5), e1000639. Urban CF, Ermert D, Schmid M, Abu-Abed U, Goosmann C, Nacken W, Brinkmann V, Jungblut PR, Zychlinsky A (2009). Neutrophil extracellular traps contain calprotectin, a cytosolic protein complex involved in host defense against Candida albicans. PLoS Pathogens, (5), e1000639.