ВИЧ-инфекция представляет угрозу для личной, общественной и государственной безопасности, а также для существования человечества в целом. Изучаемый нами антиретровирусный препарат – ламивудин, направлен на замедление репродукции вируса и на уменьшение его количества в организме человека. Современные методы оценки качества исследуемого препарата имеют ряд недостатков. Цель исследования состояла в разработке методики количественного определения ламивудина УФ-спектрофотометрическим методом с использованием оптического образца сравнения. Были изучены спектральные характеристики ламивудина при различных значениях рН и определена его аналитическая длина волны (279 нм). В качестве растворителя была выбрана 0,1 М кислота хлористоводородная, в растворе которой достигается максимальная стабильность ламивудина. Образцом сравнения стал 4,4’-диоксифталофенон, потому что аналитическая длина волны ламивудина входит в оптимальный для него интервал (268–282 нм). В формулу расчёта результатов нужно было ввести коэффициент пересчёта, который позволил учесть природу изучаемого вещества, а также различия в значениях удельных показателей поглощения ламивудина и 4,4›-диоксифталофенона. Рассчитанный коэффициент пересчёта составил 0,1985. Предложенные новые условия УФ-спектрофотометрического определения ламивудина были использованы для количественного определения ламивудина в субстанции и таблетках данного препарата. Ошибка определения ламивудина в субстанции не превышает 0,85 %, в таблетках – 1,6 %. Была проведена валидационная оценка разработанной методики УФ-спектрофотометрического определения ламивудина с использованием стандартного образца 4,4›-диоксифталофенона по критериям: специфичность, правильность, прецизионность, линейность результатов, аналитическая область методики. Полученные результаты подтвердили, что разработанная методика соответствует требованиям нормативных документов и пригодна для анализа.