В последние годы возросла значимость проблемы цитомегаловирусной инфекции в связи с широким распространением ее возбудителя, обусловленным снижением иммунологической резистентности у населения, ухудшением социально-экономических условий жизни людей, широким применением в клинической практике антибиотиков, гормонов, иммунодепрессантов. Период беременности характеризуется наличием неспецифической депрессии иммунной системы, что способствует обострению хронической инфекции. В большинстве случаев цитомегаловирусная инфекция протекает бессимптомно или в виде субклинической, инаппарантной, хронической формы, которая не вызывает никаких субъективных или объективных клинических проявлений. Об активизации хронического процесса в этом случае свидетельствуют высокие показатели титров антител [3].
Приблизительно у 15% женщин с обострением цитомегаловирусной инфекции на ранней стадии беременности регистрируется самопроизвольный аборт [6]. При этом наличие инфекции регистрируется в плаценте, но не у плода, что привело к выводу о важной роли этого органа для исходов беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции. Одной из функций плаценты является синтез стероидных гормонов для поддержания беременности. Большое значение имеют гестагены: прогестерон и его метаболиты. Основным метаболитом прогестерона в плаценте является 20α-дигидропрогестерон [2], который обладает токолитическим эффектом [8], заключающимся в поддерживании миометрия в состоянии покоя [7]. Реакция превращения прогестерона в 20α-дигидропрогестерон катализируется 20α-гидроксистероиддегидрогеназой [1].
Целью нашего исследования была оценка характера влияния цитомегаловирусной инфекции на активность 20α-гидроксипрогестерондегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинчатого хориона в первом триместре беременности.
Материалы и методы исследования
Материалом для исследования послужили 38 ворсинчатых хорионов, взятых при самопроизвольных абортах в срок 8-10 недель от женщин с диагнозом обострение хронической цитомегаловирусной инфекции (основная группа), а также 32 ворсинчатых хориона, взятых при проведении медицинских абортов на том же сроке гестации от женщин с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции (группа сравнения). Контрольную группу составили 35 ворсинчатых хорионов беременных с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии, взятых при проведении медицинских абортов в срок 8-10 недель.
Исследования проводили с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и нормативных документов «Правила надлежащей клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом №200 от 01.04.2016 МЗ РФ.
Клинический диагноз обострения хронической цитомегаловирусной инфекции устанавливался по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса, IgM или увеличение титра антител IgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%).
Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляли методами ИФА на спектрофотометре Stat Fax-2100 с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляли методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
Активность 20α-гидроксистероиддегидрогеназы определяли на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани гистохимическим методом по прописи Лойда [4]. Полученные данные анализировали с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе MEIJI (Япония).
Статистическая обработка и анализ данных осуществлялась с использованием стандартного пакета прикладных программ Statistica 6.1. Анализируемые в работе количественные данные имели нормальное распределение, поэтому рассчитывалась достоверность различий значений по Стьюденту – вычисление средней арифметической (М), средней ошибки (m). Во всех процедурах статистического анализа критический уровень значимости нулевой статистической гипотезы p принимался равным 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
На гистохимических препаратах ворсинчатого хориона беременных основной группы, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции отмечалось снижение цитофотометрического показателя активности 20α-гидроксипрогестерондегидрогеназы до 30,1±2,12 пикселей/мкм2 (р<0,001) по сравнению с группой сравнения, в которой средние значения составляли 39,9±3,01 пикселей/мкм2. В контрольной группой активность фермента была значительно выше – 47,1±2,57 пикселей/мкм2 Данный факт свидетельствовал об уменьшении интенсивности преобразования прогестерона при начавшемся самопроизвольном аборте на фоне обострения цитомегаловирусной инфекции.
|
|
|
|
|
|
|
|
Рис. Синцитиотрофобласт ворсинчатого хориона. 10 недель беременности. Гистохимическая реакция на 20α-гидроксипрогестерондегидрогеназу. Увеличение: 15×40. А – контрольная группа. Интенсивная гистохимическая реакция (47,1±2,57 пикселей/мкм2). Б – основная группа. Гистохимическая реакция резко ослаблена (30,1±2,12 пикселей/мкм2). В – группа сравнения. Гистохимическая реакция ослаблена (39,9±3,01 пикселей/мкм2). |
|
|
|
Реакция преобразования прогестерона имеет значение для сохранения и поддержания беременности, так как 20α-дигидропрогестерон, наряду с другими гестагенами, обладает токолитическим эффектом. Изучение влияния других метаболитов прогестерона при обострении цитомегаловирусной инфекции позволило сделать тот же вывод [5]. Токолитический эффект гестагенов осуществляется посредством влияния на концентрацию внутриклеточного кальция и уровень простагландинов, блокирования действия окситоцина и α- адренергической стимуляции. Под влиянием гестагенов замедляется передача нервного возбуждения с одного мышечного волокна на другое, в результате снижается активность нервно-мышечного аппарата матки [7, 8]. Обнаруженное нами снижение интенсивности преобразования прогестерона в 20α-дигидропрогестерон раскрывает возможный механизм возникновения выкидыша в первом триместре гестации,
Таким образом, снижение активности гистохимической реакции на 20α-гидроксипрогестерондегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты указывало на уменьшение содержания 20α-гидроксипрогестерондегидрогеназы в плаценте, что способствовало прерыванию беременности.
