p.g.t. Ust'-Kinel'skiy, Samara, Russian Federation
63
68.39
The aim of the study is increasing the immunological status of highly productive cows before and after calving. To conduct research, 4 groups of 10 heads each were formed from the number of cows that were in the first period of dry standing, using the principle of analogue pairs (control, experienced-1, experienced-2 and experienced-3). Cows of the control group were not injected with an immunomodulatory agent, the experimental groups were intra-muscularly injected 25-30 days before calving with an immunomodulator three times at intervals of 7 days and once 8-12 hours after calving. The immunomodulating agent was administered to cows of the experimental groups in the following dose: experimental-1 – 4.0 ml; experimental-2 – 6.0 ml; experimental-3 – 8.0 ml. The conditions for feed-ing and keeping animals of the studied groups were the same. It was found that the introduction of an immunomod-ulatory agent in a dose of 6.0 ml intramuscularly three times with an interval of 7 days 25-30 days before calving and once 8-12 hours after reduces the number of rod-nuclear neutrophils from 3.2 to 1.6%, young neutrophils-from 1.4 to 0.6%, lymphocytes – from 56.0 to 53.6% and increases segmentonuclear neutrophils from 30.08 to 35.20%, monocytes – from 2.8 to 4.8%. Indicators of natural resistance of cows that were injected with an immunomodulat-ing agent at a dose of 6.0 ml had larger gradients compared to the ones of animals in the control groups: in regard to phagocytic activity of neutrophils – by 4.67%, for bactericidal – by 5.95%, for lysozyme – by 3.41% (5 days be-fore calving). The use of an immunomodulatory agent in a dose of 6.0 ml increases the performance of the protec-tive ability of cows before and after calving.
immunomodulator, blood, serum, resistance, activity
В настоящее время при промышленном ведении молочного животноводства одним из основных факторов, сдерживающих его эффективность, является снижение репродуктивной функции коров [1, 10, 11, 12]. За последние годы достигнуты значительные успехи в области изучения и внедрения новых методов профилактики послеродовых заболеваний у животных. Однако дальнейший поиск эффективных средств предупреждения нарушения морфофункционального, иммунологического статуса и функции размножения у высокопродуктивных коров остается весьма актуальным [2, 3, 4, 5, 6].
Ряд исследователей считают, что для профилактики послеродовых осложнений коров наиболее надежным и физиологически оправданным является применение различных иммуномодуляторов, среди которых особый интерес представляют тканевые и органические иммуномодуляторы [8, 9]. Применение иммуномодуляторов основано на использовании существующей в организме универсальной системы биорегуляции метаболизма, защитного механизма организма, посредством взаимодействия клеток иммунной, нервной и эндокринной систем [7, 9]. В связи с чем изучение влияния разных доз органического иммуномодулирующего средства на показатели структуры крови, естественной резистентности организма высокопродуктивных коров до и после родов актуально.
Цель исследований – повышение иммунологического статуса высокопродуктивных коров до и после родов.
Задачи исследований – изучить морфологический состав крови (лейкоформула) коров исследуемых групп до и после родов; определить влияние разных доз иммуномодулирующего средства на морфологический состав крови и на показатели естественной резистентности организма коров.
Материалы и методы исследований. Исследования проводились на коровах голштинской породы в условиях ГУП СО «Купинское» Самарской области. После перевода коров в сухостойный период с учетом их молочной продуктивности (более 8000 кг), лактации, живой массы, линейной принадлежности было сформировано 4 группы по 10 голов в каждой (контрольная, опытная-1, опытная-2, опытная-3).
Для определения влияния иммуномодулятора органического происхождения на показатели крови и естественную резистентность организма коров использовали иммуномодулирующее средство (В. Н. Ласкавый, В. В. Рыбин, патент РФ №2077882 А61К31115) [7].
Иммуномодулирующее средство (бесцветная жидкость без запаха) – препарат, содержащий в виде активного начала формальдегид – 0,07-0,24%, натрий хлор – 0,90-0,95%, дистиллированную воду. Препарат обладает способностью усиливать функцию стволовых клеток костного мозга и стимулировать жизненно важные функции организма за счет воздействия на клеточный иммунитет, кроветворение, обменные энергетические процессы. Иммуномодулирующее средство вводили коровам опытных групп за 25-30 дней до родов внутримышечно с интервалом в 7 дней трехкратно и через 8-12 часов после родов однократно (опытная-1 – 4,0 мл; опытная-2 – 6,0 мл; опытная-3 –
8,0 мл). Животным контрольной группы иммуномодулирующее средство не инъецировали.
В процессе исследований за 25-30 дней до родов, за 5 дней до родов и через 5 дней после отела у 5 коров из каждой группы брали кровь из хвостовой вены, используя систему «Моновет», в одно и то же время суток (за 2 часа до кормления) в два контейнера: первый контейнер (содержал гепарин) – для проведения морфологических исследований; второй контейнер – для проведения исследования сыворотки крови (показатели естественной резистентности).
Морфологический состав крови изучали подготовкой мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Подсчет форменных элементов крови проводили методом цифровой микроскопии по
В. А. Дубровскому. Фагоцитарную активность нейтрофилов крови устанавливали по методу
А. И. Иванова и Б. А. Чухворина. В качестве тест-культуры использовали E. Colli O111, выращенную в течение суток на мясопептонном агаре (МПА). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу О. В. Бухарина, В. Л. Созыкина с использованием тест-культуры O111. Лизоцимную активность устанавливали по О. В. Бухарину с применением суточной культуры Micrococcus Luteus (штамм 2655 ГКИ им. Л.А. Тарасевича).
Цифровой материал проведенных исследований был обработан методом биометрической вариационной статистики по определению степени достоверности разницы сравниваемых показателей с использованием критерия Стьюдента, принятом в биологии и зоотехнии, с применением программного комплекса Microsoft Excel 10. Степень достоверности отражена соответствующими значениями: Р<0,05 *; P<0,01 **; Р<0,001 ***.
Результаты исследований. Изучением морфологической структуры крови (лейкограмма) и показателей естественной резистентности организма коров (фагоцитарная активность нейтрофилов, бактерицидная активность, лизоцимная активность) установлено, что их градиенты зависят от физиологического состояния коров (до родов и после родов), а также от дозы введения внутримышечно иммуномодулирующего средства (табл. 1, 2, 3).
Таблица 1
Морфологический состав крови коров исследуемых групп
|
Форменные элементы крови, % |
За 25-30 дней до отела |
За 5 дней до отела |
|||
|
Группа животных |
|||||
|
контрольная |
опытная-1 |
опытная-2 |
опытная-3 |
||
|
Базофилы |
1,90±0,08 |
1,80±0,06 |
1,60±0,07 |
1,20±0,05 |
1,60±0,05 |
|
Эозинофилы |
4,25±0,09 |
4,00±0,08 |
3,80±0,06 |
3,00±0,01 |
3,60±0,03 |
|
Нейтрофилы: |
|
|
|
|
|
|
юные |
2,4±0,13 |
1,40±0,06 |
1,20±0,07 |
0,60±0,04 |
0,80±0,03 |
|
палочкоядерные |
4,28±0,18 |
3,20±0,10 |
3,00±0,01 |
1,00±0,05 |
1,40±0,06 |
|
сегментоядерные |
31,8±0,72 |
30,20±0,80 |
31,00±0,64 |
35,20±0,52 |
33,60±0,48 |
|
Лимфоциты |
48,65±0,84 |
56,00±0,82 |
56,20±0,76 |
53,60±0,63 |
54,60±0,26 |
|
Моноциты |
2,95±0,07 |
2,80±0,06 |
3,20±005 |
4,80±0,05 |
4,40±0,06 |
Таблица 2
Морфологические показатели крови через 5 дней после отела
|
Форменные элементы крови, % |
Группы животных |
|||
|
контрольная |
опытная-1 |
опытная-2 |
опытная-3 |
|
|
Базофилы |
1,40±0,66 |
1,60±0,04 |
1,20±0,05 |
1,20±0,05 |
|
Эозинофилы |
5,00±0,04 |
4,60±0,64 |
3,20±0,06 |
3,40±0,04 |
|
Нейтрофилы: |
|
|
|
|
|
юные |
2,00±0,02 |
1,60±0,03 |
0,80±0,04 |
0,80±0,05 |
|
палочкоядерные |
4,20±0,06 |
3,80±0,08 |
2,20±0,06 |
2,40±0,04 |
|
сегментоядерные |
28,40±0,72 |
29,60±0,69 |
34,20±0,58 |
34,40±0,55 |
|
Лимфоциты |
56,60±1,80 |
56,20±1,96 |
54,00±1,08 |
53,60±1,14 |
|
Моноциты |
2,40±0,04 |
2,60±0,06 |
4,40±0,06 |
4,20±0,04 |
Количество базофилов за 25-30 дней до родов (до введения иммуномодулирующего средства) составляло 1,90±0,08%. После трехкратного введения иммуномодулирующего средства
согласно методике исследований за 5 дней до родов в крови коров опытных групп: первой – 1,60±0,06%; второй – 1,20±0,05%; третьей – 1,60±0,05%; в крови коров контрольной группы – 1,80±0,06%, что на 0,2; 0,6; 0,4%, соответственно, больше, чем в крови коров опытных групп.
Таблица 3
Показатели естественной резистентности организма коров исследуемых групп
|
Группа животных |
Показатель |
||
|
фагоцитарная активность нейтрофилов, % |
бактерицидная активность, % |
лизоцимная активность, % |
|
|
До введения препарата за 25-30 дней до отела |
|||
|
Все группы животных |
53,30±0,08 |
50,40±0,21 |
15,41±0,19 |
|
За 5 дней до родов |
|||
|
контрольная |
64,05±0,35 |
58,18±0,18 |
16,43±0,14 |
|
опытная-1 |
66,25±0,28** |
55,04±0,19 |
17,69±0,17 |
|
опытная-2 |
68,72±0,21** |
59,13±0,14* |
19,83±0,13** |
|
опытная-3 |
69,01±0,31** |
59,06±0,20* |
18,87±0,18* |
|
Через 5 дней после отела |
|||
|
контрольная |
62,24±0,25 |
52,23±0,29 |
15,38±0,24 |
|
опытная-1 |
65,05±0,31* |
53,48±0,31 |
16,34±0,30 |
|
опытная-2 |
68,14±0,36** |
58,62±0,25** |
19,66±0,28** |
|
опытная-3 |
68,20±0,41** |
58,47±0,30** |
19,70±0,33** |
Содержание эозинофилов в крови коров за 25-30 дней до родов составило 4,25±0,09%, что больше, чем за 5 дней до отела, по сравнению с показателем контрольной группы на 0,25%, по сравнению с показателем опытных групп: первой – на 0,45%, второй – на 1,25%; третьей – на 0,65%.
В крови коров, которым не вводили иммуномодулирующее средство (коровы контрольной группы), за 5 дней до отела наблюдалось повышенной содержание палочкоядерных и юных нейтрофилов, что указывает на напряженное состояние иммунной системы, оно подтверждается низким содержанием сегментоядерных нейтрофилов. Содержание сегментоядерных нейтрофилов в крови животных контрольной группы, по сравнению с показателем первой опытной группы, меньше на 0,20%, второй опытной группы – на 4,40%, третьей – 2,80%. Количество моноцитов в крови коров контрольной группы снизилось до 2,80%, количество лимфоцитов увеличилось на 7,35%. На 5 день после отела показатели морфологического состава крови у животных опытных групп (содержание форменных элементов), характеризующие иммунный статус коров, превосходят таковые контрольной группы. Так, количество сегментоядерных нейтрофилов в крови животных второй и третьей опытных групп на 5,8, 5,6%, моноцитов – на 2,0 и 1,8%, соответственно, больше, чем в крови коров контрольной группы.
В контрольной группе показатели естественной резистентности организма коров за
25-30 дней до родов составили: фагоцитарная активность – 53,30±0,28%; бактерицидная активность – 50,40±0,21; лизоцимная активность – 15,41±0,39%. У животных контрольной группы за 5 дней до родов произошло увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов на 11,02%; бактерицидной активности – на 2,78%; лизоцимной активности – на 1,08%, что указывает на влияние беременности на показатели естественной резистентности организма перед родами.
Активизация показателей иммунной защиты организма коров зависит от дозы введенного иммуномодулирующего средства. Градиента фагоцитарной активности нейтрофилов за 5 дней до родов в крови коров контрольной группы на 2,20% меньше, чем в крови коров первой опытной группы и на 4,67, 4,96% меньше, чем в крови коров второй и третьей опытных групп, соответственно. Фагоцитарная активность нейтрофилов после родов снижается у коров всех исследуемых групп. Наибольшее снижение на 5 день после отела отмечено у животных контрольной группы и составило 62,24±0,25%, что на 1,81% меньше, чем за 5 дней до родов. У животных опытных групп показатель естественной резистентности составил: первой опытной группы – 65,05±0,31%; второй опытной группы – 68,14±0,36%; третьей опытной группы – 68,20±0,41%.
Бактерицидная активность сыворотки крови за 5 дней до родов у коров опытных групп больше, чем у коров контрольной (53,18±0,18%): первой – на 1,86, второй – на 5,95; третьей – на 5,88%. Показатель бактерицидной активности сыворотки крови также имеет тенденцию снижения после родов у коров всех исследуемых групп, но у животных опытных групп данная градиента больше, чем в контрольной группе: первой опытной группы – на 1,25%; второй опытной группы – на 6,39%; третьей опытной группы – на 6,24% (разница значимо достоверна (Р<0,01) между контролем и второй, третьей опытными группами).
Лизоцимная активность за 25-30 дней до родов составила 15,41±0,19%, что меньше, чем в контроле, за 5 дней до родов на 1,08%. После введения коровам опытных групп согласно методике исследований иммуномодулирующего средства показатели лизоцимной активности сыворотки крови за 5 дней до родов достоверно значимо увеличились у коров второй и третьей групп – на 3,41% (Р<0,01) и на 2,42% (Р<0,05), соответственно. Показатель лизоцимной активности сыворотки крови на 5 день после отела составил в третьей опытной группе 19,70±0,33%, что на 0,04% больше, чем во второй опытной группе (Р>0,05) (разница не достоверна). Лизоцимная активность сыворотки крови в контрольной группе меньше, чем в первой, на 0,96% (Р>0,05), чем во второй – на 4,28%; чем в третьей – на 4,32% (разница значимо достоверна, Р<0,01).
Снижение иммунологического статуса коров перед родами свидетельствует о нарушении обмена веществ, что по мнению А. В. Воробьева [2] и В. Ф. Дегай [5] является основной этиологией послеродовых осложнений.
Заключение. Иммуномодулирующее средство в дозе 6,0 мл внутримышечно за 25-30 дней до родов трехкратно с интервалом в 7 дней и однократно после отела через 8-12 часов способствует снижению за 5 дней до родов палочкоядерных нейтрофилов от 3,2 до 1,6%, юных нейтрофилов – от 1,4 до 0,6%, лимфоцитов – от 56,0 до 53,6% и увеличению сегментоядерных нейтрофилов – от 30,8 до 35,2%, моноцитов – от 2,8 до 4,8%. Показатели естественной резистентности организма коров второй опытной группы за 5 дней до родов имели большую величину по сравнению с этими показателями организма коров контрольной группы: по фагоцитарной активности нейтрофилов на 4,67%, по бактерицидной активности – на 5,95%, по лизоцимной активности – на 3,41%. После отела показатели морфологического состава крови и естественной резистентности организма коров, характеризующие их иммунологический статус по содержанию сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов, градиент естественной резистентности организма, были достоверно больше у коров, которым вводили иммуномодулирующее средство в дозе 6,0 мл, по сравнению с этими показателями организма коров контрольной группы. Между группами животных, которым вводили иммуномодулирующее средство в дозе 6,0 и 8,0 мл, достоверной разницы не отмечено.
Использование иммуномодулирующего средства в дозе 6,0 мл внутримышечно трехкратно с интервалом в 7 дней за 25-30 дней до родов и однократно через 8-12 часов после родов обеспечивает повышение показателей иммунологического статуса организма коров перед родами и в послеродовой период.
1. Abylkasymov, D. A., Ionova, L. V., & Kamynin, P. S. (2013). Problema vosproizvodstva krupnogo rogatogo skota v visokoproduktivnikh stadakh [The problem of reproduction of cattle in highly productive herds]. Zootekhniya - Zootechniya, 7, 28-29 [in Russian].
2. Vorobyov, A. V. (2010). Morfologicheskie i biohimicheskie pokazateli krovi korov posle otela pod vliianiem im-munostimuliatorov [Morphological and biochemical blood parameters of cows after calving under the influence of immunostimulants]. Izvestiia Orenburgskogo GAU - Izvestia Orenburg SAU, 28, 4, 216-218 [in Russian].
3. Grin', V. A., & Rodionova, T. N. (2011). Farmakokorrekciia obmena veshchestv i poslerodovikh oslozhnenii u korov preparatami «Selenolin» i «Nitamin» [Pharmacological correction of metabolism and postpartum complica-tions in cows with the preparations «Selenolin» and «Nitamin». Veterinariya Kubani - Veterinaria Kubani, 12, 3 [in Russian].
4. Gutashvili, N. N. (2003). Immunobiologicheskaia reaktivnost korov i metodi ee korrekcii [Immunobiological re-activity of cows and methods for its correction]. Veterinariya - Veterinariya, 12, 34 [in Russian].
5. Degai, V. F. (2007). Profilaktika poslerodovikh oslozhnenii u korov [Prevention of postpartum complications in cows]. Veterinariia seliskohoziaistvennikh zhivotnikh - Veterinary of agricultural animals, 3, 53-56 [in Russian].
6. Zaitsev, V. V., & Tarabrin V. V. (2005). Vzaimosvyaz pokazatelei estestvennoi rezistentnosti zhivotnikh s ikh vosproizvoditelinimi kachestvami [Interrelation of indicators of natural resistance of animals with their reproductive qualities]. Actual problems of pork production in the Russian Federation '05: sbornik nauchnykh trudov - collection of proceedings. (pp. 84-86). Persianovka [in Russian].
7. Laskavy, V. N., & Rybin V. V. (2015). Immunomoduliruiushchee sredstvo [Immunomodulating agent]. Patent 2077882, Russian Federation, IPC A61K 31/00, IPC A61K 9 [in Russian].
8. Nezhdanov, A. G., & Smirnova E. V. (2014). Povisheniie ustoichivosti korov k poslerodovim zabolevaniiam s ispolizovaniem Selemaga i Immunofana [Increasing the resistance of cows to postpartum diseases using Selemag and Immunofan]. Veterinariya - Veterinariya, 10, 37-40 [in Russian].
9. Slobodyanik, V. I., Shiryayev, S. I., & Slobodyanik, M. V. et al. (2009). Immunokorrektory v akusherstve [Im-munocorrectors in obstetrics]. Vestnik Voronezhskogo gosudarstvennogo agrarnogo universiteta - Vestnik of Voro-nezh State Agrarian University, 2 (21), 56-59 [in Russian].
10. Stekolnikov, A. A., & Plemyashov, K. V. (2009). Obmen veshchestv i ego korrekciia v vosproizvodstve krupno-go rogatogo skota [Metabolism and its correction in the reproduction of cattle]. Modern problems of veterinary sup-port of animal reproductive health '09: materiali Mezhdunarodnoi nauchno-prakticheskoi konferencii - materials of the International scientific-practical conference. (p. 228). Voronezh [in Russian].
11. Shabunin, S. V., & Nezhdanov, A. G. (2012). Sistemnoe reshenie problemi sohraneniia vosproizvoditelinoi sposobnosti i produktivnogo dolgoletiia molochnogo skota [A systematic solution to the problem of preserving the reproductive ability and productive longevity of dairy cattle]. Modern problems of veterinary obstetrics and biotech-nology of animal reproduction '12: materiali Mezhdunarodnoi nauchno-prakticheskoi konferencii - materials of the International scientific-practical conference. (pp. 10-20). Voronezh [in Russian].
12. Dobson, H., Smith, R. F., & Royal, M. D. et al. (2007). The high producing cow and its reproductive perfor-mance. Reproduction in Domestic Animals, 42 (2), 17-23 [in Russian].
