ДЕЙСТВИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО СИНБИОТИКА БЛЭД-1 В КОМПЛЕКСЕ С ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНОМ НА МИКРОФЛОРУ КИШЕЧНИКА СЛУЖЕБНЫХ СОБАК
Аннотация и ключевые слова
Аннотация (русский):
Цель исследования – нормализация микрофлоры кишечника служебных собак в структуре ГУ МВД России путем применения синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина. Работа проводилась в условиях ГУ МВД России по Самарской области. Лабораторные исследования проводились на базе ФГБОУ ВО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» в 2018 г. Объект исследований – служебные собаки породы немецкая и бельгийская овчарка. Пробы фекалий от животных отбирали до утреннего кормления и начала тренировок. Из проб фекалий готовили баксуспензию в последовательных десятикратных разведениях. Инокулят высевали в чашки Петри и пробирки на дифференциально-диагностические и элективно-селективные среды. Видовой состав микробиоценоза желудочно-кишечного тракта служебных собак, содержащихся в условиях ГУ МВД России по Самарской области, центра кинологической службы г. Самары состоял из резидентных и транзиторных микроорганизмов. Доля представителей Lactobacillus delbrueckii и Bifidobacterium bifidum в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта собак контрольной группы составляла 96,00%, а доля условно-патогенных и пато-генных микроорганизмов – 4,00%. Доля представителей Lactobacillus delbrueckii и Bifidobacterium bifidum в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта собак опытной группы составляла 97,42%, а доля условно-патогенных и патогенных микроорганизмов – 2,58%. Это обусловлено действием синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина при одинаковых условиях содержания и режима тренинга служебных собак. Способность к образованию биоплёнок была наиболее высокой у Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus delbrueckii. При этом способность к образованию биоплёнок в результате применения синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина была выше у собак опытной группы: Bifidobacterium bifidum – 80,34±2,18 и Lactobacillus delbrueckii − 86,12±3,73, у собак контрольной группы: Bifidobacterium bifidum – 67,38±2,64 и Lactobacillus delbrueckii − 73,62±3,18.

Ключевые слова:
собаки, синбиотик, дигидрокверцетин, микрофлора, кишечник
Текст
Текст (PDF): Читать Скачать

Увеличение срока службы собак является актуальной темой, поскольку на ветеринарное обслуживание, воспитание и обучение только одной собаки тратится огромное количество времени, средств и задействуется целый ряд специалистов. При этом у каждого животного своя узкая специализация. Это обуславливает использование большого человеческого и экономического ресурса. Необходимо задействовать эффективные, апробированные и экономически оправданные средства различного происхождения. Одним из таких средств является дигидрокверцетин. Биофлавоноид оказывает бактерицидное воздействие на патогенную  и условно-патогенную микрофлору бактерии группы кишечной палочки, сальмонеллы, иерсинии и другие энтеробактерии, стафилококки и стрептококки, листерии и многих других представителей транзиторной микрофлоры, включая микрогрибы [3, 4, 5]. Биофлавоноид дигидрокверцетин (ДГК, DHQ) с химической формулой C15H12O7 в мире известен как Taxifolin (Таксифолин) и считается уникальным антиоксидантом, природным акцептором свободных радикалов кислорода. Дигидрокверцетин является своего рода мощным гепатопротектором, радиопротектором, обладает противовоспалительным, обезболивающим и, самое главное, иммунокоррегирующим свойствами [4, 5].

Пробиотики и синбиотики повышают концентрацию бифидобактерий и лактобацилл в микробиоценозе организма животных и человека [6, 7].

Важным является активация биологических свойств антагонистически активных микроорганизмов, например, энтерококков кишечной микрофлоры животных [10].

Цель исследований нормализация микрофлоры кишечника служебных собак в структуре ГУ МВД России путем применения синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина.

Задачи исследований выделение и идентификация у собак микрофлоры желудочно-кишечного тракта; изучение морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, серологических свойств микроорганизмов; определение факторов патогенности и персистенции микроорганизмов при использовании комплекса препаратов экспериментального синбиотика БЛЭД-1 и дигидрокверцетина.

Материал и методы исследований. Работа проводилась в условиях ГУ МВД России по Самарской области. В Центре кинологической службы г. Самары 30 животных. Лабораторные исследования проводились на базе ФГБОУ ВО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» в 2018 г.

Объект исследований – служебные собаки породы немецкая и бельгийская овчарка. Первую группу (контрольную) сформировали из животных, имеющих основной рацион и режим тренировок. Всего в группе было 15 собак (10 голов породы немецкая овчарка, 5 голов породы бельгийская овчарка). Вторую группу (опытную) сформировали из собак, имеющих основной рацион с дополнением дачи экспериментального синбиотика БЛЭД-1 и препарата дигидрокверцетина. Всего в группе
15 собак (10 голов породы немецкая овчарка, 5 голов породы бельгийская овчарка).  Условия кормления, содержания и режим тренировок у собак контрольной и опытной групп были одинаковыми. Материал для исследований – пробы фекалий собак. 

Экспериментальный синбиотик с инулином и антиоксидантами  (дигидрокверцетином и селеном) БЛЭД-1 представляет собой концентрированную взвесь живых микроорганизмов-продуцентов,  антиоксиданта и селена. Синбиотик производится согласно ТУ.

Пробы фекалий от животных отбирали до утреннего кормления и начала тренировок. Из проб фекалий готовили баксуспензию в последовательных десятикратных разведениях.  Инокулят высевали в чашки Петри и пробирки на дифференциально-диагностические и элективно-селективные среды. Посевы культивировали при 25-37оС в течение 48-72 ч с использованием одноразового стерильного микробиологического г-образного шпателя [9]. Чистые культуры микроорганизмов идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам с использованием штатива для уленгутовских и микроцентрифужных пробирок [8]. Биохимические свойства микроорганизмов изучали постановкой пёстрого ряда со средами Гисса, в пластинах ПБДЭ (пластина для биохимической дифференциации энтеробактерий) и в других специфических тестах, по общепринятым методикам. Определение факторов патогенности микроорганизмов проводили общепринятыми методами.

Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с помощью программ «Биостатистика» и Microsoft Office Excel 2007.

Результаты исследований. Установлено, что общее число микроорганизмов в 1 г фекалий у собак контрольной группы составляло 11,19х1010±0,16. Среди них количество транзиторных микроорганизмов составляло 1,24х106±0,08. Видовой состав микробиоценоза желудочно-кишечного тракта собак контрольной группы состоял из резидентных и транзиторных видов микроорганизмов (табл. 1, 2).

Таблица 1

Резидентные микроорганизмы в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта
собак контрольной группы

Культура микроорганизмов

Количество микроорганизмов, 10n

Enterococcus faecium

5,13х108±0,21

Enterococcus faecalis

2,87х108±0,08

Enterococcus hirae

0,82х108±0,06

Enterococcus flavescens

0,52х108±0,04

Enterococcus casseliflavus

0,22х108±0,03

Bacteroides fragilis

3,82х106±0,12

Bifidobacterium bifidum

6,58х1010±0,24

Lactobacillus delbrueckii

3,98х1010±0,72

Micrococcus luteus

6,28х104±0,46

Streptococcus canis

7,42х104±0,36

Prevotella oralis

5,38х105±0,28

Escherichia coli

5,64х104±0,44

Serratia marcescens

3,74х105±0,12

 

Таблица 2

Транзиторные микроорганизмы в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта
собак контрольной группы

Культура микроорганизмов

Количество микроорганизмов, 10n

1

2

Citrobacter freundii

2,48х104±0,42

Kluyvera cryocrescens

2,86х104±0,12

Providencia alcallifaciens

3,88х104±0,15

Proteus vulgaris

4,02х103±0,40

Morganella morganii

5,04х103±0,18

Hafnia alvei

5,32х104±0,36

Окончание табл. 2

1

2

Erwinia amylovora

3,42х104±0,08

Enterobacter cloacae

5,14х104±0,28

Klebsiella oxytoca

4,06х104±0,42

Yersinia enterocolitica

0,22х103±0,02

Salmonella enteritidis

1,24х103±0,06

Helicobacter pylori

5,26х104±0,32

Staphylococcus aureus

2,74х105±0,12

Streptococcus pneumoniae

6,38х105±0,16

 

В контрольной группе в ходе изучения микрофлоры кишечника у двух собак была выделена культура патогенных стафилококков Staphylococcus aureus, сапрофитная культура микрококков Micrococcus luteus, условно-патогенная культура превотелл Prevotellaoralis. В ходе изучения у всех собак была выделена условно-патогенная культура стрептококков Streptococcus pneumoniae и условно-патогенная культура Streptococcus canis. В ходе исследования фекалий у четырёх собак контрольной группы выделена условно-патогенная культура Helicobacter pylori, у всех собак выявлены условно-патогенные энтеробактерии Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacae, а также энтерококки, сапрофиты лактобациллы Lactobacillus delbrueckii, бифидобактерий Bifidobacterium bifidum. Данные культуры микроорганизмов также выявлялись авторами ранее в ходе исследования резидентной и транзиторной микрофлоры собак в условиях Самарской области [1, 2].

В опытной группе собак общее число микроорганизмов в 1 г фекалий  было на уровне 16,69х1010±0,23. Среди них количество транзиторных микроорганизмов составляло 2,51х105±0,08. Видовой состав микробиоценоза желудочно-кишечного тракта собак опытной группы представлен в таблицах 3 и 4.

Таблица 3

Резидентные культуры микроорганизмов в видовом составе микробиоценоза
желудочно-кишечного тракта  служебных собак опытной группы

Культура микроорганизмов

Количество микроорганизмов, 10n

Enterococcus faecium

5,72х108±0,58

Enterococcus faecalis

3,08х108±0,12

Enterococcus hirae

1,52х108±0,04

Enterococcus flavescens

0,74х108±0,02

Enterococcus casseliflavus

0,44х108±0,04

Bacteroides fragilis

3,82х106±0,26

Bifidobacterium bifidum

9,52х1010±0,64

Lactobacillus delbrueckii

6,74х1010±0,26

Micrococcus luteus

7,16х105±0,32

Prevotella oralis

3,14х103±0,52

Escherichia coli

5,22х104±0,23

Serratia marcescens

4,62х105±0,18

Leptotrichia buccalis

4,16х104±0,22

 

Таблица 4

Транзиторные микроорганизмы в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта
собак опытной группы

Культура микроорганизмов

Количество микроорганизмов, 10n

Citrobacter freundii

3,02х104±0,12

Kluyvera cryocrescens

2,82х104±0,24

Providencia alcallifaciens

3,44х104±0,28

Proteus vulgaris

4,26х103±0,38

Morganella morganii

4,12х103±0,12

Hafnia alvei

3,74х104±0,38

Erwinia amylovora

3,54х104±0,20

Enterobacter cloacae

5,06х104±0,18

Klebsiella oxytoca

2,63х104±0,08

Yersinia enterocolitica

0,26х103±0,02

Salmonella enteritidis

0,45х103±0,08

В опытной группе у собак в ходе изучения микрофлоры кишечника была выделена сапрофитная культура микрококков Micrococcus luteus, условно-патогенная культура превотелл Prevotella oralis,условно-патогенная культура лептотрихий Leptotrichia buccalis. Культура патогенных стафилококков Staphylococcus aureus выделена не была.

У собак опытной группы в пробах фекалий условно-патогенная культура Helicobacter pylori отсутствовала, были выделены условно-патогенные энтеробактерии Escherichia coli, Enterobacter cloacae, энтерококки, сапрофиты лактобациллы Lactobacillus delbrueckii и бифидобактерии Bifidobacterium bifidum.

В ходе исследования биохимических и серологических свойств у культур энтерококков, выделенных авторами от служебных собак, желатиназная активность и гемолитическая активность не выявлена. Это свидетельствует об отсутствии данных факторов патогенности (вирулентности) у выделенных энтерококков. К факторам патогенности (вирулентности) относят определённую группу протеолитических ферментов, продуцируемыми энтерококками. Высокая активность протеолитических ферментов у представителей рода Enterococcus является важнейшим инструментом антагонистической способности по отношению к патогенным микроорганизмам. В ходе исследования установлено, что все выделенные и идентифицированные культуры энтерококков обладали протеолитической активностью (табл. 5, 6). При этом у собак опытной группы протеолитическая активность энтерококков была менее выражена, чем у энтерококков собак контрольной группы.

Таблица 5

Протеолитическая активность культур энтерококков у собак контрольной группы

Культура Enterococcus sp.

Протеолитическая активность, мг∙мл/мин

Enterococcus faecium

0,96±0,016

Enterococcus hirae

0,58±0,012

Enterococcusfaecalis

0,74±0,014

Enterococcus flavescens

0,68±0,012

Enterococcus casseliflavus

0,42±0,024

 

Таблица 6

Протеолитическая активность культур энтерококков у собак опытной группы

Культура Enterococcus sp.

Протеолитическая активность, мг∙мл/мин

Enterococcus faecium

0,62±0,004

Enterococcus hirae

0,34±0,008

Enterococcus faecalis

0,56±0,006

Enterococcus flavescens

0,45±0,005

Enterococcus casseliflavus

0,27±0,003

 

Среди факторов персистенции антилизоцимная и антикарнозиновая активность выявлены только у культур энтерококков. Основными показателями, определяющими персистентные свойства микроорганизмов, являются антилизоцимная активность, антикарнозиновая активность и способность к образованию биоплёнок.

В результате исследования антилизоцимной активности у представителей рода  Enterococcus  выявлено, что данный признак встречался у 100% изолятов, выделенных от служебных собак. Уровень проявления антилизоцимной активности был более высоким у изолятов Enterococcus hirae, а наименьшим – у изолятов Enterococcus casseliflavus (табл. 7, 8). При этом у собак опытной группы антилизоцимная активность энтерококков была меньше по сравнению с антилизоцимной активностью энтерококков собак контрольной группы.

Таблица 7

Антилизоцимная активность энтерококков, выделенных от собак контрольной группы

Культура Enterococcus sp.

Антилизоцимная активность, мкг/мл∙ед

Enterococcus faecium

2,37±0,018

Enterococcus hirae

3,46±0,004

Enterococcus faecalis

2,16±0,008

Enterococcus flavescens

1,68±0,012

Enterococcus casseliflavus

1,25±0,007

 

Таблица 8

Антилизоцимная активность энтерококков, выделенных от собак опытной группы

Культура Enterococcus sp.

Антилизоцимная активность мкг/мл∙ед

Enterococcus faecium

1,85±0,012

Enterococcus hirae

2,58±0,010

Enterococcus faecalis

1,63±0,009

Enterococcus flavescens

1,22±0,008

Enterococcus casseliflavus

0,54±0,002

 

Выживание условно-патогенных бактерий реализуется через их способность к адаптации и инактивации защитных свойств макроорганизма.  Дипептид природного происхождения карнозин
(β-аланил
L-гистидин) является одним из основных факторов неспецифической реактивности организма человека и животных. Все изоляты энтерококков, выделенные от служебных собак, обладали антикарнозиновой активностью. Уровень проявления антикарнозиновой активности был более высоким у изолятов Enterococcus hirae, а наименьшим – у изолятов Enterococcus casseliflavus
(табл. 9, 10). Антикарнозиновая активность энтерококков собак опытной группы была менее выраженной по сравнению с антикарнозиновой активностью энтерококков собак контрольной группы.

Таблица 9

Антикарнозиновая активность культур энтерококков у собак контрольной группы

Культура Enterococcus sp.

Антикарнозиновая активность, мг/мл

Enterococcus faecium

2,76±0,015

Enterococcus hirae

3,42±0,014

Enterococcus faecalis

2,47±0,013

Enterococcus flavescens

1,36±0,010

Enterococcus casseliflavus

1,28±0,008

 

Таблица 10

Антикарнозиновая активность культур энтерококков у собак опытной группы

Культура Enterococcus sp.

Антикарнозиновая активность мг/мл

Enterococcus faecium

1,43±0,012

Enterococcus hirae

2,38±0,016

Enterococcus faecalis

1,56±0,015

Enterococcus flavescens

1,08±0,012

Enterococcus casseliflavus

0,32±0,002

 

Одним из важнейших биологических свойств микроорганизмов, способствующих их адаптации и переживаемости в микробиоценозе желудочно-кишечного тракта животных и человека, является способность к образованию биоплёнок. Способность к образованию биоплёнок выявлена у всех резидентных микроорганизмов, идентифицированных у собак. При этом способность к образованию биоплёнок у микроорганизмов собак опытной группы была значительно выше, чем у микробов собак контрольной группы (табл. 11, 12).

Таблица 11

Способность образовывать биоплёнки микробами у собак контрольной группы

Микроорганизмы

Способность образовывать биоплёнки, %

Enterococcus faecium

25,34±1,38

Enterococcus hirae

41,48±1,55

Enterococcus faecalis

21,44±1,46

Enterococcus flavescens

19,82±1,16

Enterococcus casseliflavus

18,22±1,08

Bacteroides fragilis

15,24±1,06

Bifidobacterium  bifidum

67,38±2,64

Lactobacillus delbrueckii

73,62±3,18

Micrococcus luteus

31,15±2,83

Streptococcus canis

18,27±1,52

Prevotella oralis

16,38±1,04

Escherichia coli

48,77±2,59

Serratia marcescens

28,45±1,72

Таблица 12

Способность образовывать биоплёнки микроорганизмами у собак опытной группы

Микроорганизмы

Способность образовывать биоплёнки, %

Enterococcus faecium

37,12±1,45

Enterococcus hirae

63,74±3,63

Enterococcus faecalis

42,78±2,33

Enterococcus flavescens

30,58±1,68

Enterococcus casseliflavus

33,67±1,92

Bacteroides fragilis

20,13±1,34

Bifidobacterium  bifidum

80,34±2,18

Lactobacillus delbrueckii

86,12±3,73

Micrococcus luteus

38,45±2,13

Streptococcus canis

22,64±1,33

Prevotella oralis

20,19±1,59

Escherichia coli

57,13±2,44

Serratia  marcescens

35,62±1,98

Leptotrichia  buccalis

29,43±1,75

 

Способность к образованию биоплёнок была наиболее высокой у Bifidobacterium bifidum
и Lactobacillus delbrueckii. Способность к образованию биоплёнок в результате применения дигидрокверцетина и синбиотика БЛЭД-1 у собак опытной группы у культуры Bifidobacterium bifidum составила 80,34±2,18 и Lactobacillus delbrueckii − 86,12±3,73, у собак контрольной группы была ниже:
у культуры
Bifidobacterium bifidum – 67,38±2,64 и Lactobacillus delbrueckii − 73,62±3,18.

Заключение. Комплекс препаратов синбиотик БЛЭД-1 и дигидрокверцетин оказал положительное влияние на микрофлору организма служебных собак. Это привело к подавлению жизнедеятельности транзиторных патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в микробиоценозе животных. В результате у собак возросла численность полезной сапрофитной микрофлоры (Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus delbrueckii), участвующей в процессе обмена энергии и веществ, а также оказывающей, в том числе, антиоксидантное и бактерицидное действие на стороннюю микрофлору.

Список литературы

1. Ермаков, В. В. Резидентная и транзиторная микрофлора бродячих кошек и собак в условиях Самарской области / В. В. Ермаков // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. − 2013. − № 1. − С. 15-19.

2. Ермаков, В. В. Эффективность действия пробиотика бактистатина в комплексе с дигидрокверцетином на микробиоценоз собак при трансмиссивной венерической саркомой / В. В. Ермаков, Ю. А. Курлыкова // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. − 2018. − № 2. − С. 40-46.

3. Батанов, А. Ю. Влияние антиоксидантов на рост и интерьерные показатели ремонтного молодняка крупного рогатого скота / А. Ю. Батанов, С. Д. Батанов, О. А. Краснов // Аграрная наука. − 2011. − № 10. − С. 23-24.

4. Бизюк, Л. А. Антиоксидант дигидрокверцетин - клинико-фармакологическая эффективность и пути син-теза / Л. А. Бизюк, М. П. Королевич // Лечебное дело: научно-практический терапевтический журнал. − 2013. − № 1 (29). − С. 13-19.

5. Бовкун, Г.Ф. Использование дигидрокверцетина флавит и его смеси с пробиотиком при выращивании бройлеров / Г. Ф. Бовкун, Ю. В. Овсеенков // Вестник Брянской государственной сельскохозяйственной ака-демии. − 2014. − № 2 (2014). − С. 22-27.

6. Калашникова, В. А. Мониторинг кишечных заболеваний и анализ спектра кишечной микрофлоры у обе-зьян / В. А. Калашникова, О. А. Султанова // Ветеринария и кормление. - 2018. - № 1. - С. 37-39.

7. Лукьянчикова, Е. Оптимизация микрофлоры кишечника - путь к повышению продуктивности / Е. Лукьян-чикова, С. Шеламова // Свиноводство. - 2016. - № 3. - С. 65-67.

8. Пат. 184921 Российская Федерация, МПК В01L 9/06, А 61В 10/02. Штатив для уленгутовских и микро-центрифужных пробирок / Ермаков В. В., Котов, Д. Н. - № 2018125607 ; заявл.12.07.18 ; опубл.14.11.18, Бюл. № 18.

9. Пат. 163081 Российская Федерация, МПК С12М 1/14, А 61В 10/02. Одноразовый стерильный микробио-логический г-образный шпатель / Ермаков В. В. - № 2016100537/14 ; заявл.11.01.16 ; опубл.10.07.16, Бюл. № 19.

10. Щепитова, Н. Е. Биологические свойства антагонистически активных энтерококков кишечной микро-флоры животных / Н. Е. Щепитова, М. В. Сычева, О. Л. Карташова // Вестник Оренбургского государствен-ного университета. − 2014. − № 13 (174). − С. 134-138.

Войти или Создать
* Забыли пароль?