Цель: Исследовать влияние экстракта гриба Lecanicilium lecanii на активность 15-липоксигеназы (15-ЛО) и радиационный апоптоз тимоцитов крыс. Материал и методы: Экстракт получали при обработке гриба Lecanicilium lecanii ацетоном. Ацетон удаляли, а осадок растворяли в этаноле. Тимоциты крыс Вистар подвергались воздействию рентгеновского излучения в дозе 6 Гр и инкубировали 6 ч в питательной среде. Апоптоз тимоцитов регистрировали по повреждению ядер и фрагментации ДНК. 15-ЛО выделяли из ретикулоцитов крыс Вистар. Активность 15-ЛО определяли по окислению линолевой кислоты. Результаты: Экстракт гриба подавлял активность 15-ЛО. Концентрация экстракта, снижающая активность 15-ЛО на 50 % (IC50) составила 15 мкг/мл. После облучения тимоцитов доля поврежденных ядер увеличивалась до 67 %. Добавление экстракта сразу после облучения снижало процент повреждённых ядер и фрагментацию ДНК в облучённых тимоцитах. Эффект увеличивался с ростом концентрации экстракта, и при дозе экстракта 50 мкг/мл процент повреждённых ядер в облучённых тимоцитах падал до контроля (16 %), а фрагментация ДНК снижалась до уровня ниже контрольного. IC50 экстракта по снижению повреждения ядер равна 6 мкг/мл. Выводы: Полученные данные показывают, что экстракт гриба Lecanicilium lecanii содержит эффективный ингибитор 15-ЛО.
апоптоз, тимоциты, радиация, 15-липоксигеназа
Одним из существенных факторов, осложняющих успешную лучевую терапию опухолей, является пострадиационный иммунодефицит, обусловленный гибелью лимфоидных клеток. Особенно чувствительны к облучению тимоциты – предшественники зрелых Т-клеток. Облучение инициирует в них гибель по типу апоптоза. Известно, что продукты 15‑липоксигеназы (15‑ЛО) необходимы для запуска апоптоза при некоторых воздействиях в разных типах клеток. Радиационный апоптоз тимоцитов подавляется общим ингибитором липоксигеназ нордигидрогваяретовой кислотой (НДГК), но не специфическими ингибиторами 5 и 12-липоксигеназ. Показана активация 15‑ЛО в течение часа после облучения.
1. Maccarrone M., Ranalli M., Bellincampi L. et al. Activation of different lipoxygenase isozymes induces apoptosis in human erythroleukemia and neuroblastoma cells Biochem. Biophys. Res. Com. 2000. Vol. 272. № 2. P. 345-350.
2. Sandstrom P.A., Pardi D., Tebbey P.W. et al. Lipid hydroperoxide-induced apoptosis: lack of inhibition by Bcl-2 over-expression FEBS Lett. 1995. Vol. 365. № 1. P. 66-70.
3. Гриченко О.Е., Шапошникова В.В., Левитман М.Х. и соавт. Исследование роли липоксигеназ в радиационном апоптозе тимоцитов // Радиац. биол. Радиоэкология. 2004. Т. 44. № 1. С. 27-31.
4. Матышевская О.П., Пастух В.Н., Солодушко В.А. Ингибирование липоксигеназной активности снижает индуцированную радиацией фрагментацию ДНК лимфоцитов Радиац. биол. Радиоэкология. 1999. Т. 39. № 2-3. С. 282-286.
5. Shaposhnikova V.V., Dobrovinskaya O.R., Eidus L.Kh., Korystov Y.N. Dependence of thymocyte apoptosis on protein kinase C and phospholipase A2 FEBS Lett. 1994. Vol. 348. № 3. P. 317-319.
6. Гриченко О.Е., Пушин А.С., Шапошникова В.В. и соавт. Исследование активности 15-липоксигеназы в тимоцитах после облучения // Изв. АН. Серия биол. 2004. № 5. С. 1-5.
7. Пужевская Т.О., Бибикова М.В., Грамматикова Н.Э., Катлинский А.В. Влияние природных гиполипидемических соединений на формирование биоплёнок штаммами рода Pseudomonas // Антибиотики и химиотерапия. 2009. Т. 54. № 1. С. 10-13.
8. Rapoport S.M., Schewe T., Wiesner R. et al. Purification, characterization and biological dynamics of the lipoxygenase; its identity with the respiratory inhibitors of the reticulocyte // Eur. J. Biochem. 1979. Vol. 96. № 3. P. 545-561.
9. Мешкова Н.П., Северин С.Е. Практикум по биохимии. - М.: МГУ. 1979. 430 с.
